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公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定
Methods of microbiological examination for tea set in public places
--Determination of aerobic bacterial count
1 范围
本标准规定了公共场所茶具细菌总数的测定方法。 本标准适用于公共场所内公用茶具细菌总数的测定。 2 引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T 18204.2--2000公共场所空气微生物检验方法 细菌总数测定 3 定义
本标准采用下列定义。
细菌总数 aerobic bacterial count
指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1 cm表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。
细菌总数是公用茶具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用茶具消毒效果的判定和评价提供了依据。 4 仪器
4.1 高压蒸汽灭菌器。 4.2 干热灭菌箱。 4.3 培养箱,36℃ 4.4 冰箱。 4.5 电炉。 4.6 天平。
4.7 灭菌平皿：直径9 cm。
1℃。
2
4.8 灭菌刻度吸管：1 mL，I0 mL。 4.9 灭菌棉拭子。 4.10 灭菌剪刀。 4.11 放大镜。
4.12 pH计或精密pH试纸。 5 培养基和试剂 5.1 生理盐水
5.1.1 成分：氯化钠 8.5g
蒸馏水 1 000 mL
5.1.2 制法；将氯化钠(8.5 9)溶解于蒸馏水（1 000 mL）中，分装到试管内，每管10 mL，121℃20 min高压灭菌。 5.2 营养琼脂
见GB/T 18204.1--2000中第4章第1节。 6检验程序
细菌总数检验程序如下：
7 操作步骤 7.1 采样方法
7.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。
7.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘，涂抹50 cm，即1～1.5 cm高处一圈（口唇接触处）。用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放入10 mL生理盐水内，4h内送检。
7.2 检验方法
7.2.1 将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。
7.2.2 以无菌操作，吸取2 mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1 mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1 mL加到9 mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1:100稀释液。每个稀释度做两块平皿。
2
7.2.3 将巳融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾人平皿，每皿约15 mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放36℃
8 菌落计数方法
作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落效。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中荫落分布均匀。则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。 实际公用茶具菌落数，按式(1)计算：
???????????????(1)
1℃培养箱培养48 h。
式中：a——细菌总数，；
b——平均菌落数； n——稀释倍数。 9 菌落计数的报告
9.1 选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告（见表1中例1）。 9.2 若有两个稀释度一其平均菌落数均在30～300之间。则由两苗落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2，则报告其中稀释度较低的平皿菌落数（见表l中例2、例3）。
9.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300。则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例4）。
9.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30。则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例5）。
9.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一个稀释度平均菌落数大于300，而相邻的另一个稀释度平均菌落数小于30，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例6）。
9.6 若所有的稀释度均无菌生长。报告数为每毫升小于1 cfu（见表l中例7）。
9.7 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五人法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表1中报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。×10
4
表1 细菌计数结果及报告方式
例次 l 2 3 4 5 6 7
不同稀释度平均菌落数 10 1 365 2 760 2 890 不可计 27 不可计 0 -1两稀释度 菌落总数 菌数之比 cfu/mL — l.6 2.2 — — — — 16 400 38 000 27 100 513 000 270 30 500 0 报告方式 cfu/mL 16 000或 1.6×10 38 000或3.8×10 27 000或 2.7×10 510 000或5.1×10 270或2.7×10 31000或3.1×10 ＜1 42544410 164 295 271 4 650 n 305 O -210 20 46 60 513 5 12 O -3