发布时间 : 星期三 文章提取分离纯化苦参中氧化苦参碱的工艺研究更新完毕开始阅读
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第二章 提取分离纯化苦参中氧化苦参碱的工艺研究
2.1 提取工艺
1 粉碎度的考察：
取苦参饮片（氧化苦参碱含量3.25%）3份每份300g，分为1、2、3组：第1组饮片剪碎处理，将饮片剪至1-2cm的规格；第2组饮片处理成粗颗粒，用锤子将饮片处理成约0.5cm的规格；第3组打粉处理，将饮片用打粉机处理然后过筛，约50%的饮片被处理成粉末并且能过20目的筛网，剩余的饮片打粉后为纤维状无法过筛网，称取药材时按比例称取粉末和纤维。
上述3组药材按照不同的方法处理完后进行氧化苦参碱的提取，提取的方法相同：处理后的药材用14倍量水（即4200ml水）煮沸提取1.5小时，倒出一煎液，再加入12倍量水（即3600ml水）煮沸提取1.5小时，倒出二煎液。每组对应的一煎液二煎液量体积取样进行HPLC分析。
该次试验用的苦参，氧化苦参碱含量为3.25%，故300g药材中含有的氧化苦参碱的质量为9750mg。
表1：不同粉碎度苦参饮片的氧化苦参碱的转移率
粉碎度
体积（ml） 氧化苦参碱质转移率（%） 一煎二煎总
量（mg）
碎片 粗颗粒 粉末
4000 3400 3600 3800 3400 3800
6249.94 1350.16 6011.20 1410.92 5484.87 1425.78
64.10 13.85 61.65 14.47 56.26 14.26
70.88 76.21 转移率（%）
77.95
从试验的数据看出，第1组的氧化苦参碱的提取率略高于其他两组，且第1组的药材饮片的处理较其他两组都要简便，故选用第1组的处理方法即将药材饮片处理成1~2cm的片段作为饮片预处理的方法。
粉碎是中药前处理过程中的必要环节，通过粉碎可增加药物的表面积，促进药物溶解与吸收，加速药材中有效成分的浸出。但粉碎过细，药粉比表面积太大，吸附作用增强，
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反而影响扩散，影响提取效率。苦参是根类药材提取时粗颗粒为宜，实验结果也证明了药材处理的过细会影响氧化苦参碱的提取率，1~2cm的片段最适宜氧化苦参碱的提取。 2 浸泡时间考察：
取苦参饮片（氧化苦参碱含量3.25%）3份每份300g，将饮片处理成1~2厘米的片段，3份饮片分别浸泡0小时、2小时、4小时[1]，提取的方法为回流提取法，加14倍量水和12倍量水煮沸1.5小时，药液放冷后滤过，每份的一煎液和二煎液的滤液分别取样进行HPLC的含量测定。0小时、2小时、4小时浸泡后氧化苦参碱的转移率分别为69.89%、69.17%、67.35%，由此可得出，浸泡时间对氧化苦参碱的提取基本无影响。
表2：不同浸泡时间苦参饮片的氧化苦参碱的转移率 浸泡时间
体积（ml） 氧化苦参碱质转移率（%）
量（mg）
0小时 2小时 4小时
氧化苦参碱在热水中较高的溶解度和热稳定性，药材饮片浸泡的时间虽然不同但是在提取时加入的溶剂量和煮沸的时间是相同的，由于氧化苦参碱在热水中溶解度较高和热稳定性的性质可能是导致浸泡时间对氧化苦参碱的提取率影响较小的原因。 3 苦参提取正交
根据极性的强弱和经验将溶剂的含醇量分为0%、40%、80% 3种[2] [3] [4]。一般中药提取的时间为1小时，故选取0.5、1.0、1.5这3个不同的提取时间来提取[5]。溶剂量[7] [8]一般以12倍量为准，二煎由于有效成分在一煎时已经被提取了大部分故减少了2倍量，选取的溶剂量为10+8、12+10、14+10这3个不同的溶剂量。
选取溶剂含醇量、溶剂量、提取时间为考察因素，以氧化苦参碱总转移率为指标，采用L 9(34 )正交表安排试验。
表3：苦参提取正交因素水平表
水平\\因素 1 2
溶剂含醇量（%） 溶剂量（倍数） 提取时间（h）
0 40
6
3500 3600 3400 3400 3700 3500
5257.92 1526.39 5240.25 1503.42 5424.03 1142.41
69.09
69.17
67.36
10+8 12+10
0.5+0.5 1.0+1.0
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3
80 14+12 1.5+1.5
表4：苦参提取正交表
组别\\因素 1 2 3 4 5 6 7 8 9
溶剂含醇量（%） 溶剂量（倍数） 提取时间（h） 0 40 80 0 40 80 0 40 80
10+8 12+10 14+12 14+12 10+8 12+10 12+10 14+12 10+8
0.5+0.5 0.5+0.5 0.5+0.5 1.0+1.0 1.0+1.0 1.0+1.0 1.5+1.5 1.5+1.5 1.5+1.5
称苦参饮片（氧化苦参碱含量4.16%）9份，每份300g，将饮片处理成小于1~2厘米的片段。苦参提取的装置是电热套，方法是回流提取。实验过程中，按照对应组别所示的条件进行试验。100ml固体质量为蒸发皿和固体的总重减去蒸发皿重所得。 表5：苦参提取正交中各组氧化苦参碱的转移率及除杂率 组别
体
积含
量转移率100ml固体除杂
含固总量 体量（g）
1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2
4530 5705 7180 6750 4495 5920 5720 6785 4840 203.79 209.58
6365.21 65.10 7978.36 70.75 8671.59 67.94 7660.75 76.66 7148.84 67.30 8190.18 65.68 7190.76 74.42 9753.76 82.53 7385.14 65.85 216.12 220.58
198.25 210.85
1.59 1.25 0.91 1.09 1.69 1.14 1.47 1.13 1.47
72.027 91.16 71.312 88.81 65.338 86.72 73.575 89.58 75.966 90.58 67.488 87.86 84.084 91.44 76.671 87.27 71.148 89.62
7
（ml） （mg） （%） 率（%）
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K3 R
222.80 6.33
199.47 5.55
227.07 9.60
除杂率=100%-氧化苦参碱质量/总固体质量，除杂率仅作参考 以下的除杂率均相同
表6：氧化苦参碱提取正交方差分析
方差来源 溶剂含醇量 溶剂量 提取时间 误差
平方和 63.198 82.691 139.761 2.9206
自由度 2 2 2 2
均方 31.600 41.350 69.88 1.460
F值 21.639 28.310 47.850
由表6可以看出，溶剂含醇量、溶剂量、提取时间这3个变量的F值均大于18，由此得出该3个变量对氧化苦参碱的提取都有较高的影响，实验结果表示第8组即14+12倍量的40% 乙醇提取1.5+1.5小时，氧化苦参碱的转移率最高，有82.53%，因此第8组的提取条件最优，该组的除杂率91.18%也很高。
2.2 分离纯化工艺
1 苦参纯化树脂类型的考察：
苦参药材3份每份300g（氧化苦参碱含量3.25%）提取，抽取上清液，用2%NaOH调滤液的pH为7-8，调完pH后的滤液共有2.07L，留样，均分为3份每份约为6.9L，分别过A、B、C大孔树脂柱，树脂量为600ml，上柱速度为3BV/h，水洗速度为2BV/h，洗脱液为90%乙醇共4BV，洗脱速度为1BV/h。A、B、C柱的流出液分别为6300ml、6500ml、6400ml，分别留样进行HPLC测定。A、B、C柱的洗脱液分别为950ml、1055ml、1225ml，分别留样进行HPLC含量测定。
表7：3种树脂用90%乙醇对氧化苦参碱的洗脱效果
名称
体积（ml）
氧化苦参碱质量转移率（%） （mg）
柱前液 A流出液 B流出液 C流出液
6900 6300 6500 6400
6264.76 1665.56 204.32 1858.96
8
100.00 26.59 3.26 29.67