发布时间 : 星期三 文章输血科标准操作规程SOP文件(检验科)更新完毕开始阅读
近的。
3．标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。
【试剂】
1．抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞。 2．抗人球蛋白检测卡。
3．3～5%红细胞悬液：取多个“O”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成3～5%红细胞悬液。
【操作步骤】
1．准备样本，患者血清（血浆）、抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞或3～5%红细胞悬液。 2．标记抗人球蛋白检测卡、姓名、住院号、标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。 3． 微柱中加50ul待检样本血清（浆）。
4．加抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞各50ul（0.8%）。 5．37℃ 15分钟，离心10分钟。
6．读结果和记录。离心时，凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应。未凝集血细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。
7．报告结果于检验之星中。 【附注】
1．判读试验结果常用的代号是: 4+：一个结实的凝集块。 3+：几个大的凝集块。
2+：中等大的凝块，背景清晰。 1+：小凝集块，背景混浊。 士：微小凝集块，背景混浊。 O：无凝集或溶血。
PH：表示部分溶血，有一些细胞残留。 H：表示完全溶血，无残留细胞。 2．抗体筛查试验结果的解释 抗体筛检试验是很有价值的，但也有其局限性。一个阴性试验不一定意味着这一血清中没有抗体，而只是在使用这些技术时，缺乏与筛查细胞起反应的抗体。如果临床资料和其他实验室所见提供了另外的线索，就应扩大常规筛查方法。例如，如果ABO正反定型不符，就应在室温下做抗体筛查。如疑为溶血性输血反应、新生儿溶血病或自身免疫性溶血性贫血，有必要做酶试验或以放散液做筛查，以证明引起疾病的抗体。
第五节 抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验标准操作程序
【方法原理】
抗人球蛋白试验(antiglobulin test, AGT)又称Coombs试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法、将抗人球蛋白血清(antiglobulin serum, AGS)加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗人球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。抗人球蛋白血清除可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分(C3、C4)。所谓广谱AGS，即包括抗IgG和抗C3抗体。
【标本采集和处理】
标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。
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【试剂】
1. 1%标准A/B/O型红悬。 2．抗人球蛋白检测卡。 3. 0.9%生理盐水。 【操作步骤】
一、ABO血型、RH血型鉴定、直接抗人球蛋白试验：
（1） 在戴安娜微柱凝胶新生儿血型卡的8个孔中分别加入1%的样本红细胞50ul； （2） 血型卡直接放入专用离心机离心，观察结果。
二、释放试验
(1） 取压积红细胞0.2 ml洗涤三次，再加0.2 ml生理盐水，56℃水浴10分钟，2000转/ min离心3 min，吸取上清液备用；（即放散液） （2） 根据新生儿ABO血型，分别在微孔中加入1%标准A/B/O型红悬50ul，然后加入50ul上清液，置37℃孵育15分钟，离心，观察结果。
患者ABO血型为“A”型的，加入标准A型、O型红细胞悬液； “B”型的，加入标准B型、O型红细胞悬液；
“AB”型的，加入标准A型、B型、O型红细胞悬液； “O”型的，加入标准O型红细胞悬液。 三、游离抗体测定 （1）根据新生儿ABO血型，分别在微孔中加入1%标准A/B/O型红悬50ul，然后加入50ul样本血清；（原则同上）
（2）置37℃孵育15分钟，离心，观察结果。
结果判断：
（1） ABO血型、RH血型鉴定、直接抗人球蛋白试验结果判断： 第1-5孔为血型检测； 第6孔Ctl为阴性对照管； 第7孔为兔多克隆抗IgG； B AB D D ' Ctl. IgG AHG 第8孔AHG为抗人球蛋白试验结果。 A（2） 游离、释放试验结果判断：
5 AHG AHG AHG AHG AHG AHG AHG AHG
凝集有80%的红细胞在微柱管下端2/3以下者（即1+以上）为阳性。
第六节 血液交叉配血试验标准操作规程
血液交叉配血试验标准操作程序
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交叉配血主要是检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，故受血者血清加供 血者红细胞相配的一管称为“主侧”；供血者血清加受血者红细胞相配的一管称为“次侧”，两者合称交叉配血。
交叉配血试验又称不配合性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验，完整的操作 规程应包括：①查阅受血者以前的血型检查记录，如与这次检查结果有所不同，应及时分析原因；②对收到的受血者血样应作ABO正反定型，Rh血型和其他血型检查以及血型抗体检测和鉴定；③选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。
一、配血要求
1． 受血者配血试验的血样（血型复查）必须是输血前三天之内的；
2．核对病人资料：核对输血申请单、受血者血样、病历三者，其内容包括：患者姓名、性别、年龄、科室床号、住院号、血型（原始血常规血型和血型复查中血型）、用血品种、用血量等，必须正确无误；
3．核对血液：血液完整性、血液标签、血液质量；
4．核对取血凭证：按临床（取血凭证）实际用血品种、量进行配发血； 5．配血前，先复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型）、Rh（D）血型和抗筛，并报告其结果；
6．在电子病历或急诊医生工作站中，检查临床输血五项的执行情况；
7．输注全血、浓缩红细胞、洗涤红细胞、浓缩白细胞等患者应进行交叉配血试验，其方法：采用盐水配血试验、凝聚胺法。
二、盐水配血试验标准操作程序 【方法原理】
本法是目前最常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO不配合性。当受血者血清（浆）和供血者红细胞经混合并离心后，如有ABO不配合问题，就会很快显示出来。
【标本采集和处理】
1．标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。
2．标本采取时间：要求受检者血样一定要在输血前48h（抗筛是48h）内采集，血样必须是新近的，无溶血现象。
【试剂】
1．抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体 长春博德） 2．Anti-D (IgM) Biotest。 3．0.9%生理盐水 【操作步骤】
1．从贮血冰箱中取出所需血液，取试管一支，贴上小标签，在血袋配血管中剪下配血管于试管内。
2．取试管二支，标明主次侧，主侧管加受血者血清（浆）2滴，供血者5%红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清（浆）2滴，受血者5%红细胞悬液1滴。混匀，以1000r/min离心1min。
3．观察结果：轻轻侧动试管，冬季应注意冷集素干扰。ABO同型配血，“主侧”和“次侧”均无溶血及凝集表示无输血禁忌，可以输血。
三、凝聚胺配血试验标准操作程序 【方法原理】
利用低离子介质（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（浆）中的抗体结合。加入凝聚胺（Polybrene）溶液后，可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液（Resuspending）具有中和凝聚胺的作用，使正常的红细
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胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。
【标本采集和处理】
1．标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。
2．标本采取时间：要求受检者血样一定要在输血前48h内采集，血样必须是新近的，无溶血现象。
【试剂】
1．抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体 长春博德） 2．Anti-D (IgM) Biotest。 3．0.9%生理盐水
4．凝聚胺试剂：低离子介质（LIM）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液 (Resuspending)。 【操作步骤】
1．从贮血冰箱中取出所需血液，取试管一支，贴上小标签，在血袋配血管中剪下配血管于试管内。
2．取试管二支，标明主次侧，主侧管加受血者血清（浆）2滴，供血者5%红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清（浆）2滴，受血者5%红细胞悬液1滴。
3．各加LIM0.7ml，混匀，再各加Polybrene溶液2滴，并混匀。 4．用离心机1000g离心力（普通离心机以3400rpm），离心10秒，然后把上清液倒掉，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，无凝集，则必须重做。
5．最后加入Resuspending 2 滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果，如在30秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。
6．血液交叉合格后，应在医院血库管理软件中进行配血、出库操作，打印血液交叉报告单和患者输血不良反应反馈单。然后，保存。 【附注】
血液样本的保留和贮存：受血者和供血者的血液样本必须密封或盖紧，在每次输血之后，应在2～6℃保存至少7天以上。
第七节 血液出库（发血）标准操作规程
血液出库（发血）标准操作程序
一、核对、签字
1．严格执行“三查”、“八对”制度（见输血科“三查”、“八对”制度）。
2．输血科（血库）发血时，应当认真检查申请单的填写项目，合格后方可发血。未按卫生部《医疗机构临床用血管理办法》第十一条规定办理申报手续的不得发血。
3．配血合格后，由医务人员凭取血凭证到血库取血，领血时，收发双方共同核对患者（姓名、性别、年龄、科室床号、住院号、血型、用血品种、用血量）和血站名称、许可证号、血型、血袋编号、血品种、血量、血液质量、血袋完整性、血液有效时间以及配血试验结果等，准确无误时，双方共同签字后方可发血。
二、血液出库
1．发血在医院血库管理软件中进行（详见医院血库管理软件操作细则），并打印交叉配血报告单和患者输血不良反应反馈单。
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