发布时间 : 星期六 文章输血科标准操作规程SOP文件(检验科)更新完毕开始阅读
分型血清+受检者红细胞 抗—A 抗—B 抗—A+B ＋ － ＋ － ＋ ＋ － － － ＋ ＋ ＋ 受检者血型 A B O AB 受检者血清+试剂红细胞 A细胞 B细胞 O细胞 － ＋ － ＋ － － ＋ ＋ － － － － 注：＋=凝集；－=不凝集。 7．“AB”注意冷凝集或自身凝集，可以在37℃水浴中鉴别。 8．血型复查结果输入检验之星中，核对后审定报告。
第三节RhD血型鉴定标准操作程序 RhD血型鉴定标准操作程序
RhD血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇到相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。若误诊误治，可导致患者残废或死亡。临床输血时，一般需作助血型鉴定。
一、RhD血型鉴定标准操作程序 【原理】
应用血凝试验检测红细胞抗原。RhD血型是由红细胞表面是存在或缺失D抗原确定。D抗原于细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。 【试剂】
RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体）
【操作】
1．盐水法 取小试管(10mm×60mm)1支，蜡笔标记，加试剂1滴，再加人5%受检者红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。
2．对照管 用蜡笔标记阳性和阴性，分别加人抗D血清（IgM）1滴，阳性对照管加Rh阳性红细胞1滴，阴性对照管加Rh阴性红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。 3．结果判定 如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管凝集，即表示受检者红细胞上有相应抗原；受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。
【附注】
1．单克隆IgM Rh抗血清有商品试剂供应，可用盐水介质做凝集试验。抗血清（IgM）1滴，加5%受检者红细胞悬液1滴，混合，置7℃水浴1h，观察凝集反应。
2．如临床上只要求检查是否为Rh(D)阳性还是阴性，只需用抗D血清进行鉴别。如结果为阴性，则应进一步检查排除弱D。
3.在我国汉族人群中，Rh阳性占99.66%，Rh阴性占0.34%。
4.阳性对照可取3人0型红细胞混合配成。阴性对照不易得到，一般设计方法为正常AB型血清1滴，加5% D阳性红细胞悬液1滴和菠萝酶试剂混匀，与受检管一同置7℃水浴1h。
5．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应时，凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
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【假阳性反应原因分析】
1．试剂中存在具有其他特异性的抗体(指不完全D抗体)，因此，对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验，因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检查人员意识到有进一步试验的必要。 2．多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。
3．当用未经洗涤的细胞做试验时，试样中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。
4．试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。
【假阴性反应原因分析】
1．搞错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。
2．试管中漏加抗血清，在加人细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。
3．未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞间的比例以及温育的温度和时间不正确。
4．抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。 二、弱D（weaK D）型鉴定标准操作程序 【原理】
根据美AABB技术手册第12版(1996)规定：D“这术语不再使用，携带弱的D抗原的红细胞仍被归类为D阳性，称之“弱D（weaK D）”。原称之“D”红细胞一部分具有与正常D 阳性红细胞同样性质的D抗原，只是D抗原数量减少；另一部分原“D”红细胞D抗原与正常D抗原相比缺少正常D抗原中1个或多个抗原表位。
弱D型红细胞与某批或几批抗D血清在盐水介质及酶试验中不发生凝集，但在间接抗人球蛋白试验中均发生凝集。因此，当用酶试验检查发现与抗D不凝集时，不应轻率地定为Rh阴性，需进一步排除弱D型的可能。 【试剂】
1． 抗D血清不同生产单位或批号不同的抗D血清3～5个。 2． 抗人球蛋白血清。 3．1%菠萝酶溶液。 4．5%受检红细胞悬液。 【操作】
1．将受检者红细胞分别与各批抗D血清作间接抗人球蛋白试验(方法见本章第四节)。 2．将受检者红细胞分别与各批抗D血清作酶试验(方法见本章第五节)。 【结果判定】
受检红细胞与各批抗D血清在酶试验中都不凝集或只与其中1批或数批抗D血清凝集，但在间接抗人球蛋白试验中都凝集者，都属弱D型细胞。
【附注】
1．在临床输血中，弱D型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗体。所以受血者若为弱D型，应作Rh阴性论，应输注Rh阴性血液；供血者为弱D型者，应作Rh阳性论，不应当输血给Rh阴性的受血者。
2.弱D型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可能发生新生儿溶血病。
第四节 红细胞血型抗体筛查标准操作规程
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红细胞血型抗体筛查标准操作程序
红细胞血型抗体检查适用于下列情况：
1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时； 2．供血者血清抗体筛检；
3．输血前受血者血清抗体检查；
4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时； 5．孕妇血清的抗体检查；
6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；
7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。 筛查方法
一、盐水介质法： 【方法原理】
有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。对患者或供血者的血样不需要用这种方法。在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的， 而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。
【试剂】
1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。
因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。
筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。
每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。 如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。
合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。
2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。因为：
①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释； ②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；
③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。 血清标本的采取时间应注意：例如，受血者血样一定要在48h内采集。为了检出由于最近红细胞刺激而产生的抗体，血样必须是新近的。如果抗体筛查结果阴性，有时需要隔数天后重新采样复查，因为此时抗体的浓度可逐渐增强。
每一样本应详细记录病史，包括姓名、性别、年龄、民族、妊娠史、输血史，使用过哪些药物(如甲基多巴、青霉素、先锋霉素等)、采样日期、有无抗凝剂、抗凝剂的种类和剂量、血液样本的外观、有无溶血、黄疽以及红细胞比积等。
【操作步骤】
1．取受检者血清2滴于标好的试管中。
2．取2%试剂（筛查）红细胞悬液l滴于每个试管中，混和。
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3．1000r/min离心1min（离心速度和时间应按质控规定）。 4．观察溶血和凝集反应，记录结果。
5．按需要置室温（22～24℃）温育15～30 min。
6．离心，观察溶血和凝集，并记录结果。溶血或凝集都是阳性结果。 7．报告结果于检验之星中。 二、凝聚胺法 【方法原理】
利用低离子介质（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（浆）中的抗体结合。加入凝聚胺可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液，具有中和凝聚胺的作用，使正常红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。
【标本采集和处理】
1．标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。
2．血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。
3．标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。
【试剂】
1．抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞。
2．凝聚胺试剂：低离子介质（LIM ）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液（Resuspending）。 3．3～5%红细胞悬液：取多个“O”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成3～5%红细胞悬液。
【操作步骤】
1．准备样本，患者血清（血浆）、抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞或3～5%红细胞悬液。 2．取小试管2支，各加被检血清（浆）2滴，分别加入3～5%筛检红细胞1滴或Ⅰ和Ⅱ细胞50ul（0.8%）。
3．各加入LIM0.7ml，混合后，加凝聚胺Polybrene2滴，并混合。
4．以3400rpm，离心10秒，把上清液倒掉，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。
5．最后加入悬浮液Resuspending2滴，轻轻转动试管混合并观察结果。如凝集散开，表示由凝聚胺引起的非特异性凝集，抗体筛检结果为阴性。如凝集不散开，则红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。 6．报告结果于检验之星中。
五、微柱凝胶法 【方法原理】
利用凝胶过滤技术和离心技术，抗体筛查细胞上有特定的抗原，抗原可以和相应的抗体结合。当待检血清（浆）样本中有不完全抗体时，抗体筛查细胞和待检血清（浆）中不完全抗体可专一性的结合。抗人球蛋白可结合抗体，通过桥介作用使细胞凝集。凝集发生说明血清（浆）中有不完全抗体。
【标本采集和处理】
1．标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。
2．血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新
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