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石蜡包埋基本流程
一、取材和固定
取材宜小不宜大,一般不超过1cm,分离后应迅即杀死固定。用4%PFA固定24小时以上,流水冲洗24小时,置于70%~80%乙醇中,可长期保存。 二、脱水
脱水的目的是除去组织中的水分,便于透明、浸蜡和包埋,因为这些步骤的试剂均不能与水混溶,故必须脱水。脱水不宜操之过急或时间过长,一般为50%→70%→80%→95%(此时可加番红,使组织着色便于包埋时定位)→100%,每级停留2~4小时或更长,但无水乙醇中时间宜短。
1、95%乙醇两道I2~4h
II2h
2、无水乙醇两道 I1h
II1h
三、透明
透明的目的是将脱水剂从组织中除去,二甲苯既能与乙醇混合,又能与石蜡混溶,其穿透能力强,但易使材料变脆,使用时不能停留过长,若组织放入二甲苯中有白色混浊出现,说明脱水不彻底,应退回纯乙醇中再行脱水
3、二甲苯+无水乙醇(1:1) 20min
4、二甲苯两道 I 20min
II20min
四、浸蜡
此步的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂所替代。浸蜡过程一般从低温到高温、从低熔点到高熔点逐步进行,浸蜡需彻底。
5、浸软蜡(50~52℃)两道 I30min
II 90min
6、浸硬蜡(56~58℃) I 60min
II 30min
五、包埋
注意温度、切面、组织摆放的空间位置。可将样品编号封于蜡块上,以免样品混淆。
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