发布时间 : 星期四 文章生物化学实验讲义(最后修改版)更新完毕开始阅读
1. 激活剂可以分为哪几类？本实验中氯化钠是属于其中哪一类？ 2. 抑制剂与变性剂有何不同？试举例说明。
3. 酶反应的抑制作用有哪些类型？根据什么划分的？它们都有什么特点？
第二部分 PH对酶活性的影响
一、实验的和要求
1．了解pH对酶活性的影响 2．学习测定酶的最适pH的方法
二、实验原理
酶的活性受环境pH的影响极为显著。通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活性。一种酶表现其活性最高时的pH值，成为该酶的最适pH。低于或高于最适pH时，酶的活性逐渐降低。不同酶的最适pH值不同，例如，胃蛋白酶的最适pH为1.5-2.5，胰蛋白酶的最适pH为8等。
应当指出酶的最适pH受底物性质和缓冲液性质的影响。例如，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4-6.6，在醋酸缓冲液中则为5.6。
三、操作方法
取8个50毫升锥形瓶，编号。按下表中的比例，用吸量管添加0.2M磷酸氢二钠溶液和0.1M柠檬酸溶液，制备pH5.0-8.0的8种缓冲溶液。 锥形瓶号 0.2M磷酸氢二钠（毫升） 0.1M柠檬酸（毫升） 缓冲液pH
1 5.15 4.85 5.0 2 5.80 4.20 5.6 3 6.31 3.69 6.0 4 6.92 3.08 6.4 5 7.72 2.28 6.8 6 8.69 1.31 7.2 7 9.36 0.64 7.6 8 9.72 0.28 8.0
取9支干燥的试管，编号将8个锥形瓶中不同pH的缓冲液各取3毫升，分别加入相应号码（1-8号）的试管中。然后，再向每支试管中添加0.5%淀粉溶液2毫升。第9号试管与第5号试管的内容物相同。
向第9号试管中加入稀释200倍的唾液2毫升，摇匀后放入37℃恒温水浴中保温。每隔1分钟由第9号试管中取出一滴混合液，置于白瓷板上，滴一滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度，待结果呈橙黄色时，取出试管，记录保温时间。注意，掌握第9号试管的水解程度是本试验成败的关键之一。
以1分钟的间隔，依次向第1至第8号试管中加入稀释200倍的唾液2毫升，摇匀，并以1分钟的间隔依次将8支试管放入37℃恒温水浴中保温。然后，按
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照第9号试管的保温时间，依次将各管迅速取出，并立即加入碘化钾-碘溶液2滴，充分摇匀。观察各管呈现的颜色，判断在不同pH值下淀粉被水解的程度，可以看出pH对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其最适pH。
四、试剂和器材
一． 试剂
⑴0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液（新鲜配制）
⑵稀释200倍的新鲜唾液 ⑶0.2M磷酸氢二钠溶液
⑷0.1M柠檬酸溶液 ⑸碘化钾-碘溶液（见实验三） 二． 器材
⑴试管和试管架 ⑵吸量管（0.5，1.2，5，10毫升） ⑶锥形瓶（50，100毫升） ⑷烧杯（100毫升） ⑸量筒（100毫升） （6）玻璃漏斗 ⑺吸量管架 ⑻白瓷板 ⑼恒温水浴 ⑽滴管 ⑾秒表 ⑿滤纸
五、思考题
1．pH对酶活性有何影响？什么是酶反应的最适pH？
2．酶反应的最适pH是否是一个常数？它与哪些因素有关？这种性质对于选择测定酶活性的条件有什么意义？
3．通过几个酶学实验，你对下面问题如何认识： ⑴酶作为生物催化剂具有哪些特性？
⑵进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？
第三部分 温度对酶活性的影响
一、实验目的和要求
通过检验不同温度下的唾液淀粉酶和脲酶的活性，了解温度对酶活性的影响。
二、实验原理
酶的催化作用受温度的影响很大，一方面与一般化学反应一样，提高温度可以增加酶促反应的速度。通常温度每升高10°C，反应速度加快一倍左右，最后反应速度达到最大值。另一方面酶是一种蛋白质，温度过高可引起蛋白质变性，导致酶的失活。因此，反应速度达到最大值以后，随着温度的升高，反应速度反而逐渐下降，以至完全停止反应。反应速度达到最大值时的温度称为某种酶作用的最适温度。高于或低于最适温度时，反应速度逐渐降低。大多数动物酶的最适温度为37°C—40°C，植物酶的最适温度为50°C—60°C。但是，一种酶的最适温度不是完全固定的，它与作用时间长短有关，反应时间增长时，最适温度向数值较低的方向移动。通常测定酶的活性时，在酶反应的最适温度下进行。为了维持反应过程中温度的恒定，一般利用恒温水浴等恒温装置。
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酶对温度的稳定性与其存在的形式有关。实践证明大多数酶在干燥的固体状态下比较稳定，能在室温下保存数月以至一年。溶液中的酶，一般不如固体的酶稳定，而且容易为微生物污染，通常很难长期保存而不丧失其活性，在高温的情况下，更不稳定。
三、操作方法
唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小分子的糊精及麦芽糖。它们遇碘各呈不同的颜色。直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色；糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色。由于在不同温度下唾液淀粉酶的活性高低不同。则淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现的颜色来判断。
取3支试管，编号后各加入淀粉溶液2毫升。将第1、2号试管放入37°C恒温水浴中保温，第3号试管放入冰水中冷却，5分钟后，向第1号试管中加入煮沸5—15分钟的稀释唾液1毫升，向第2、3号试管加稀释唾液各1毫升。摇匀，20分钟后取出3支试管，各加碘化钾—碘溶液2滴，混匀，比较各管溶液的颜色。判断淀粉被唾液酶水解的程度，并说明温度对唾液酶活性的影响。
四、试剂和器材
试剂
（1）0.3％氯化纳的0.5％的淀粉溶液。 （2）稀释200倍的唾液。 （3）碘化钾—碘溶液（见实验三）。 器材
（1）试管和试管架。 （2）吸量管（1、2毫升）。 （3）烧杯（500、100毫升）。 （4）锥形瓶（100毫升 ）。 （5）玻璃漏斗。 （6）水浴锅。 （7）铁三脚架。 （8）煤气灯。 （9）恒温水浴。 （10）滤纸。
五、思考题
1. 什么是酶的最适温度？有何实践意义？
2. 为什么可以用碘化钾—碘溶液作指示剂检查温度对唾液淀粉酶活性的影响？ 3. 酶在干燥的状态下与水溶液中，它的活性受温度的影响是否相同？这个性质对酶的保存有何意义？
4. 酶反应的最适温度是酶的特征物理常数吗？它与哪些因素有关？
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实验五：酵母核糖核酸的水解及其组成成分的鉴定
一、实验目的
了解定性鉴定核酸的原理和方法。
二、实验原理
用硫酸水解RNA时，可以生成磷酸、戊糖和碱基。各种成分以下列反应鉴定：
12MoO3]沉淀。（1） 磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵[(NH4)3PO4· （2） 核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。脱氧核糖与二苯胺试剂反应生成蓝色
化合物，核糖无此反应。
（3） 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化物沉淀。
三、实验试剂与器材
1、试剂
（1） 酵母核糖核酸（RNA） （2） 10%硫酸 （3） 1N氨水
（4） 0.1N硝酸银溶液
（5） 钼酸铵试剂：将2克钼酸铵溶解在100毫升10%硫酸中
（6） 地衣酚试剂：100毫升浓盐酸加入100毫克三氯化铁，摇匀，贮存备用，
使用前加入476毫克地衣酚——又名甲基苯二酚
（7） 二苯胺试剂：将4克二苯胺溶于400毫升冰醋酸中，再加入11毫升浓硫
酸（比重1.84）。若冰醋酸不纯，试剂呈兰色或绿色，则不能使用。 2、器材
（1） 试管及试管架 （2） 试管夹 （3） 水浴锅 （4） 玻璃漏斗
（5） 锥形瓶（50毫升） （6） 量筒（10毫升） （7） 滤纸
四、实验操作
1、提取RNA
（1） 称取鲜酵母4克，置于50毫升三角瓶中，加入5%三氯醋酸溶液20毫升，用玻璃棒搅拌酵母碎块，然后将三角瓶放入100℃水浴中，加热时搅动内容物，时间为15分钟。
（2） 将三角瓶中的内容物用滤纸过滤，锥形瓶承接约1.5ml滤液，此滤液为粗提的酵母RNA。
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