发布时间 : 星期三 文章微生物学实验报告 - 图文更新完毕开始阅读
四、思考题
1．染色法在微生物学上有何实际意义？
染色法可以更方便的观察细菌的具体形态，更方便观察细菌，革兰氏染色法有更重要的意义，可以鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，在实验方面，可以通过杀死阳性或阴性菌而得到目的菌。
2．比较复染色法与单染色法的优缺点。 答：单染色法：
优点：仅用一种染料着色，所有的细菌均被染成一种颜色，简单方便，可用来观察细菌的形态和排列方式。
缺点：但无鉴别细菌的作用。 复染色法：
优点：用二种或二种以上的染料着色，由于不同种类的细菌或同种细菌的不同组成结构对染料有不同的反应性而被染成不同的颜色，从而有鉴别细菌的作用。
缺点：使用试剂较多，过程较单染色法更复杂繁琐。
3．以革兰氏染色法为例，说明它至少要涉及几种试剂？各起何作用？
答：至少用到4种试剂。结晶紫溶液进行初染，路哥氏碘液进行媒染，95%酒精进行脱色，稀释复红染液进行复染。
4．要确证一个未知细菌的革兰氏染色性质，你可用什么方法来说明你的结果是可靠的？ 答：通过在显微镜下的菌体被染的颜色可以判断，凡能使第一种染料结晶紫保留蓝色的细菌为革兰氏阳性细菌，凡被洒精脱色后染上对比颜料沙黄或稀释复红而呈红色的细菌为革兰氏阴性细菌。
微生物学实验报告
实验二 培养基的的制备灭菌及接种技术
培养基的制备和灭菌
一、目的要求
掌握基础培养基应具备的条件及其制备方法。 二、实验原理
培养基是人工配制的供给细菌或其它微生物生长繁殖的营养基质。微生物的种类虽然繁多，但对基本营养物质如碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水分等的要求却有共同性。这些营养物质的作用是：提供合成菌体和代谢产物的原料；提供生命活动必需的能量；调节代谢环境。作为培养基必须具备下列条件：①含有适当的水分和一定配比的适宜的营养物质。②具有合适的酸碱度（pH值）。③有适当的物理状态：液体培养基、固体培养基和半固体培养基。④培养基必须经灭菌成为无菌状态后方能使用。
利用培养基对细菌等进行人工培养，在微生物学上有重要意义。例如，细菌纯培养物的分离、培养，细菌生物学特性的研究、分类鉴定，菌种保藏等都需要利用培养基进行人工培养。同时在传染病的诊断、生物制品的研制、发酵生产，以及利用细菌等作为工具进行的其它学科的研究中（如遗传学、基因工程等），都离不开培养基的应用和细菌的人工培养。
基础培养基一般指的是营养肉汤培养基和营养琼脂培养基，它通常由蛋白胨（主要作为氮源）、牛肉浸膏（作为碳源、氮源、维生素和无机盐）、氯化钠（无机盐并具有维持一定的渗透压的作用）和水所组成。基础培养基含有大多数细菌生长繁殖所需要的营养物质。另外，根据培养基的组成和使用目的菌不同，还有加富培养基、选择培养基、厌氧培养基等。 三、实验内容
（一）马丁培养基的配制：
葡萄糖10.0 g、 蛋白胨5.0 g、
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.0 g 、 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5 g、 孟加拉红33.4 mg、 蒸馏水1000 mL、
实验中使用的是已经配制好的培养基粉，称取36g，加入1000ml水，分装在两个500ml的锥形瓶中，包扎，置于高温灭菌锅中121 ℃下灭菌30 min。灭菌后进行倒平板备用。 四、思考题
1．液体培养基、固体培养基、半固体培养基各有何功用？
答：液体培养基：组分均一，适宜各类微生物的营养生长。广泛应用于实验研究及大规模工业生产中，有利于广泛获得大量菌体或代谢产物。
固体培养基： 琼脂固体培养基广泛应用于微生物的分离培养、菌种鉴定和保藏。
半固体培养基：用于观察细菌的运动、菌种鉴定及测定噬菌体的效价等。 2．细菌的人工培养需要哪些条件，在微生物学上有何重要意义？
答：需要基本营养物质：如碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水分等。
细菌纯培养物的分离、培养，细菌生物学特性的研究、分类鉴定，菌种保藏等都需要利用培养基进行人工培养。同时在传染病的诊断、生物制品的研制、发酵生产，以及利用细菌等作为工具进行的其它学科的研究中（如遗传学、基因工程等），都离不开培养基的应用和细菌的人工培养。
微生物学实验报告
实验三 自然界中微生物的分离与纯化
一、目的要求
1、学习并掌握从自然界中分离微生物的方法。
2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法； 二、基本原理
土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多；其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥、偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌；自面肥或酒曲或果园土分离酵母菌。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法和划线分离法，纯化该微生物，直至得到纯菌株。
平板分离法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。该法虽然操作繁琐，但可获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水等的含菌指数或污染程度的检测。 三、实验材料 （一）菌源 1、土样：
选定采土地点后，铲去表土层2~3 cm，取3~10 cm深层土壤10 g，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌相的变化。
（二）培养基（制平板） 1、马丁培养基：
葡萄糖10.0 g、蛋白胨5.0 g、磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.0 g 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5 g、孟加拉红33.4 mg、蒸馏水1000 mL、121 ℃ 30 min灭菌。 （三）无菌水
配制无菌水，分装于250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL），每瓶内装4~4粒玻璃珠。分装试管、每管装9 mL（每组4支），121℃灭菌20min。
（四）其他物品：无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。 四、操作步骤
（一）稀释涂布平板分离法 （1）制备土壤稀释液
称取土样10 g，放入到盛有99 mL无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的三角瓶中，置摇床振荡10~20 min，使土壤均匀分散成土壤悬液（10－1）。用1 mL的无菌移液管从中吸取1mL土壤悬液，移入到分装有9 mL无菌水的试管中，吸