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实验三 卵磷脂的提取与鉴定
一、实验目的
1、掌握磷脂类物质的结构和性质。 2、掌握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。 3、掌握乙醇做溶剂提取的操作技术。 二、实验原理
磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。甘油与硫酸氢钾共热，可生成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用，生成黄色的磷钼酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。 三、仪器和试剂 1、仪器设备
电子天平(精确到0.00g，配9cm称量纸)；减压蒸馏装置（旋转蒸 发仪+水循环真空泵+相应橡胶管，用前由实验员检查是否正常；配500mL24#磨口蒸馏和接收圆底烧瓶，2500mL磨口具塞广口瓶上标注回收乙醇，与仪器同台放置，提取时重复使用）。此部分共用。 2、玻璃器皿
回流装置一套（500mL 恒温磁力搅拌电热套(配2cm磁子)1台+250 mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个）；过滤装置一套（铁架台1个+铁圈1个+玻璃漏斗1个+250 mL24#具塞磨口锥形瓶1个+18cm定性滤纸若干）；100 mL量筒各一个；100 mL烧杯一个；玻璃棒1根；长胶头滴管1个；长药勺1个；试管2支；蒸发皿1个。此部分为每组所用，放置各实验台上。
3、药品试剂（3）由实验员配制，贴好标签。 （1）鸡蛋黄 （2）95%乙醇
（3）10%氢氧化钠溶液
4、其它：红色石蕊试纸若干；剪刀2把；一次性手套若干；纸巾若干；标签纸
若干。每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。
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四、操作步骤 1、卵磷脂的提取
取250 mL24#磨口圆底烧瓶，放入2cm的磁力搅拌子，加入蛋黄20 g和95%乙醇60 mL，搅拌加热，稍冷后过滤到250 mL具塞磨口锥形瓶中，盖好塞子，滤渣同法提取2~3次，合并提取液，如滤液仍然混浊，可重新过滤直至完全透明。提取液减压蒸馏至少量，回收乙醇（放入回收瓶中），将剩余物用长胶头滴管转移置于蒸发皿内，水浴锅中蒸干，所得干物即为卵磷脂。称重并计算得率。 2、卵磷脂的鉴定
取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及2～5mL 氢氧化钠溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。
五、结果与分析 1、观察产品的颜色外观 2、计算产率 3、鉴定结果 六、思考题：
1、卵磷脂的生物学功能有哪些？
2、卵磷脂提取过程中，加入95%乙醇的作用是什么？
实验四 脂肪皂化价的测定
一、目的
1、 掌握油脂的主要理化性质
2、掌握油脂皂化价的测定原理和方法。 3、掌握滴定分析法的操作 二、原理
脂肪的碱水解称皂化作用。皂化1g 脂肪所需的KOH 的毫克数称为皂化价。脂肪的皂化价与相对分子质量成反比，由皂化价的数值可知混合脂肪的平均相对分子质量。
三、仪器、试剂和材料
1、仪器设备：电子天平(精确到0.000g，配5 ml称量瓶)。
2、玻璃器皿：回流装置一套（500mL 恒温磁力搅拌电热套(配2cm磁子)1台+250 mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个）；酸碱滴定管1支；50ml量筒1个；磨口具塞锥形瓶2只；100ml烧杯1只；玻棒1根。此部分为每组所用，放置各实验台上。 3、药品试剂：（2）~（5）由实验员配制，贴好标签。 （1）豆油
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（2）0.100mol/L 氢氧化钠乙醇溶液：以0.100mol/L标准盐酸溶液标定。 （3）0.100mol/L标准盐酸溶液：取浓盐酸8.5ml ，加蒸馏水稀释至1000ml, 然后对此溶液进行标定。
（4）70%乙醇：取95%乙醇70 ml，加蒸馏水稀释至95ml。 （5）1%酚酞指示剂：称取酚酞1g，溶于100ml 95%乙醇。 四、操作步骤
1. 在天平上称取脂肪0.5g 左右，置于250ml 圆底烧瓶中，加入0.1mol/LNaOH乙醇液50ml。装上冷凝管回流30-60min，至瓶内的脂肪完全皂化止（此时瓶内液体澄清并无油珠出现，若乙醇被蒸发，可酌情补充适量70%乙醇。
2. 皂化完毕，冷至室温，加1%酚酞指示剂2滴，以0.1mol/LHCl液滴定剩余的碱（HCl 用量少可用微量滴定管），记录盐酸用量。另作一空白实验，除不加脂肪外，其余操作均同上，记录空白实验盐酸的用量。 五、结果计算
皂化价=[（a-b ）×c×56]/W
a ：空白实验所消耗的HCl 的毫升数。
b：脂肪实验所消耗的HCl 的毫升数。 C：HCl的浓度，0.100mol/L W：脂肪的重量。
56：KOH 的摩尔质量g/ ml。 六、注意事项
1、皂化所用试剂一定要标准，所用样品量要准确。 2、实验过程应避免污染和干扰。 七、思考题
1. 什么是皂化价？它有何意义？ 2、如何检验油脂已皂化完全。
实验五 牛奶中酪蛋白的制备
一、目的与要求
1、掌握从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法 3、掌握离心、洗涤等实验操作技术 二、原理
蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有
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不同等电点而进行分离的一种方法。牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。
三、实验用品 1、仪器设备
离心机（配10ml或15ml离心管），恒温水浴锅。 2、玻璃器皿
50 mL烧杯1只，25mL烧杯2只，10 mL具塞刻度试管1支，10mL量筒1支，玻璃棒1支，长胶头滴管2支。此部分为每组所用，放置各实验台上。 3、药品试剂：（2）~（3）由实验员配制，贴好标签。 （1）牛奶
（2）0.2mol/L的pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液 （3）0.2mol/L氢氧化钠溶液 （4）冰醋酸 （5）95%乙醇
4、其它：精密pH试纸；一次性手套若干；纸巾若干；标签纸若干。每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。 四、方法和步骤
1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL，3 000r/min离心10min，除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内，加热至40℃左右，在搅拌下慢慢加入10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液，用冰醋酸调节pH=4.7，此时混浊液中有大量絮状物沉下。冷至室温，3000r/min离心10min，弃去上清液，得酪蛋白粗品。
2、用蒸馏水洗沉淀三次（每次5mL左右），3000r/min离心10min，弃去上清液。
3、将沉淀加5mL 95%乙醇洗涤，离心后所得沉淀风干，得酪蛋白制品（称重，记录）。
4、酪蛋白溶液的配制：称取酪蛋白0.01g，置25毫升烧杯中，加5mL 0.2mol/L氢氧化钠溶液，搅匀， 隔水加热，溶解后转移至10毫升容量瓶中，用少量蒸馏 水洗烧杯数次，洗液并入容量瓶中，最后加水至刻度处，摇匀，置冰箱中保存，实验六备用。 五、结果与计算
计算酪蛋白含量和得率： 1、含量：酪蛋白克数/100mL牛奶
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