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（3）应用
主要用于肠杆菌科的鉴定。其中变形杆菌、克雷伯菌、摩氏摩根菌、和结肠耶尔森菌、雷极普罗菲登斯菌为阳性。 （四） 明胶液化试验 （1）原理
细菌分泌的胞外蛋白水解酶，能分解明胶为氨基酸，使之失去原有的凝固力而液化。 （2）方法
将细菌接种于明胶培养基，在20℃ 培养7天，每天观察结果。若室温较高， 培养基自行融化时，可在冰箱内放置30 分钟后取出观察结果。 明胶平板法：在营养琼脂中加入1 ％明胶倾注平板，可分成4 个区，每区划线接种1种细菌，经1 ～2 天培养，在培养基表面加氯化汞溶液（氢化汞12g ， 水80ml ，浓盐酸16ml），在菌落周围出现透明带，表示细菌液化明胶。 （3）结果
明胶培养基半固体变成液体为阳性。明胶平板法菌落周围出现透明带为阳性。 （4）应用
根据细菌能否液化明胶，可有助于细菌的种、属的鉴定。如阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、沙雷菌、铜绿假单胞菌等为阳性。 （五） 苯丙氨酸脱氨酶试验 （1）原理
细菌产生的苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸，与氯化铁作用形成绿色化合物。 （2）方法
将待检细菌大量接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面,在35℃培养过夜。滴加10％ 三氯化铁4 ～5滴，由斜面培养物上方流下。立即观察结果,延长反应时间会引起退色。 （3）结果 斜面显示绿色为阳性。 （4）应用
本试验特异性较高。变形杆菌属、摩根菌属及普罗菲登斯菌为强阳性，其他肠杆菌科细菌大多为阴性。可用于肠杆菌科细菌的鉴定。 （六） 氨基酸脱羧酶试验 （1）原理
细菌如具有某种氨基酸脱羧酶，能使氨基酸脱羧、产生胺和CO2，使培养基变碱，指示剂变色。 （2）培养基
最常用的有3 种：赖氨酸脱羧酶培养基、鸟氨酸脱羧酶培养基、精氨酸脱羧酶培养基及对照培养基。 （3）方法
将细菌接种在上述含氨基酸的培养基及不含氨基酸的对照培养基中，接种后用无菌石蜡油覆盖，高度至少5m m 。在35℃培养4日观察结果。 （4）结果
开始阶段培养基由于葡萄糖分解呈酸性而呈黄色，以后变为紫色为阳性结果，若仅发酵莆萄糖显黄色为阴性。对照管应为黄色。 （5）应用
本实验可以作为肠杆菌科细菌鉴定的重要方法，对链球菌和弧菌科细菌鉴定也有重要作用。 （七） 精氨酸双水解试验 （1）原理
某些细菌可降解精氨酸为瓜氨酸和胺，瓜氨酸可降解为鸟氨酸、氨和二氧化碳。鸟氨酸又可受脱羧酶的作用，生成腐胺和二氧化碳。氨和腐胺可使培养基变碱，酚红指示剂随之变红色。 （2）方法
将细菌穿刺接种在索恩利（Thornley）培养基，并封以灭菌石蜡油，在35℃培养1 ～4 天， 每天观察培养基颜色变化。
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（3）结果
培养基转为红色为阳性。 三、碳源和氮源利用试验 （一） 枸橼酸盐利用试验 （1）原理
当细菌利用铵盐作为惟一氮源，并利用枸橼酸作为惟一碳源时，便可在枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸钠，生成碳酸钠，使培养基呈碱性。 （2）方法
将细菌接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，在35℃培养1～4天，每天观察培养基颜色变化。 （3）结果
西蒙氏枸橼酸盐培养基斜面上有细菌生长，且培养基变蓝色为阳性；培养7天无细菌生长，培养基颜色不变保持绿色为阴性。柯氏枸橼酸培养基斜面变红色为阳性，保持淡黄色不变色为阴性。 （4）应用
常用于肠杆菌科细菌各菌属之间鉴别。埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属、耶尔森菌属为阴性，枸橼酸杆菌、沙门菌、克雷伯菌属、沙雷菌为阳性。此外，也有助于假单胞菌、气单胞菌的鉴定。 （二） 丙二酸盐利用试验 （1）原理
细菌能利用丙二酸盐作为惟一碳源时，则能分解丙二酸钠生成碳酸钠，使培养基变碱性。 （2）方法
将细菌接种于丙二酸盐培养基培养基，置35℃培养过夜后观察结果。 （3）结果
培养基由绿色变成蓝色为阳性，无颜色改变是阴性。 （4）应用
本试验有助于鉴别肠杆菌科细菌。克雷伯菌属和亚利桑那菌为阳性，肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和哈夫尼亚菌属有不同生物型反应，其他菌属为阴性。 （三） 马尿酸钠水解试验（三氯化铁法） （1）原理
某些细菌具有马尿酸水解酶，可使马尿酸钠水解，产生苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸与三氯化铁试剂结合，形成苯甲酸铁沉淀。 （2）方法
将细菌接种于马尿酸钠培养基中，置35℃ 培养48小时后，离心沉淀， 取上清液0.8ml ，加入三氯化铁试剂0.2ml ，立即混匀，经10 ～15 分钟观察结果。 （3）结果
出现恒定的沉淀物为阳性，若有沉淀物出现，轻摇后就消失为阴性。 （4）应用
B群链球菌能分解马尿酸盐，呈阳性反应，其他链球菌为阴性。 （四） 马尿酸钠水解试验（茚三酮法） （1）原理
细菌水解马尿酸钠后形成的甘氨酸，在强氧化剂茚三酮的作用下， 氧化脱氨基， 生成氨、二氧化碳和醛，茚三酮则生成了还原型茚三酮。氨、二氧化碳与残留的茚三酮起反应，形成紫色化合物。 （2）方法
将菌液0.4 ml和等量的1％马尿酸钠溶液混合后， 于35℃ 培养2小时，加入0．2 ml茚三酮试剂混匀，出现紫色为阳性。 （4）应用
B群链球菌能分解马尿酸盐，呈阳性反应，其他链球菌为阴性。 四、细菌酶类试验
（一） 触酶（过氧化氢酶） 试验
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（1）原理
细菌的呼吸酶使细菌在代谢过程中形成过氧化氢，若细菌同时产生触酶，则可把过氧化氢分解为水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。 （2）方法
挑取纯培养菌落1接种环，置于洁净的玻片上或小试管内，滴加适量3％ 过氧化氢溶液。在1分钟内见有大量气泡产生，判为阳性结果。 （3）应用
葡萄球菌和微球菌属呈阳性，链球菌和肠球菌呈阴性。可用于革兰阳性球菌的初步区分。 （二） 氧化酶试验 （1）原理
氧化酶也称细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。在本试验中，氧化酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C 氧化， 随后此氧化型细胞色素C 再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。 （2）试剂
a 盐酸四甲基对苯二胺1g 、抗坏血酸1g ，水100 ml ，盛于棕色瓶内，避光在4 ℃保存。 b 萘酚1g 、95 ％乙醇95 ml 、盛于棕色瓶内，在4 ℃避光保存。 （3）方法
a 取滤纸一小块，涂抹菌苔少许，加试剂a，立即呈粉红色，迅速转为紫红色者为阳性。
b 在滤纸上先滴加少许试剂a，再滴加等量的试剂b，然后涂抹待测菌，立即呈现蓝色者为阳性，2分钟无颜色变化为阴性。 （4）应用
主要用于奈瑟菌属和非发酵菌的鉴定，绝大多数菌为阳性，也用于肠杆菌科细菌的确定，该科细菌氧化酶试验都为阴性。本试验也有助于识别气单胞菌和邻单胞菌。 注：试剂在空气中易发生氧化，加入抗坏血酸可减缓氧化，未加抗坏血酸的试剂需每星期新鲜配制。实验时避免接触含铁的物质。因葡萄糖发酵可抑制氧化酶活性，实验菌苔不宜采用含葡萄糖的培养基上的菌落。
（三） 硝酸盐还原试验 （1）原理
硝酸盐培养基中的硝酸盐（NO3） 可被某些细菌还原为亚硝酸盐（N04），后者与醋酸作用生成亚硝酸。亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸，再与α萘胺结合成红色的N-α萘胺偶氮苯磺酸。 （2）试剂
a 甲液：对氨基苯磺酸0.8g ；5 mol／L 乙酸100 ml 。 b 乙液：α萘胺0.5g ；5mol／L 乙酸100 ml 。 c 锌粉：少许。 （3）方法
将待检菌接种于硝酸盐培养基(内置一小倒管)，置35℃温育1 ～4 天，每天吸出培养液少许，试验前临用时等量混合试剂甲液和乙液，在培养液中加1 ～2 滴混合试剂，阳性者立即出现红色。并观察小倒管，如有气泡产生，表示有氮气产生。若加入硝酸盐还原试剂不出现红色，可加入锌粉少许，如出现红色证明产生芳基肼，表示硝酸盐仍存在；如不产生红色，表示硝酸盐已被还原为氮和氨。 （4）应用
本试验是细菌鉴定中的重要生化反应。肠杆菌科细菌为阳性反应（极少数例外，如痢疾志贺菌Ⅰ型为阳性）。如铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气。而不动杆菌属均为阴性。 （四） 磷酸酶试验 （1）原理
磷酸酶可使单磷酸酯水解。反应基质若是磷酸酚酞，经该酶水解后可释放出酚酞，在碱性条件下呈红色。 （2）方法
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将被检细菌接种磷酸酚酞平板上，置35℃培养18 ～24 小时，在平板盖内加1 滴浓氨水熏蒸片刻。观察菌落，呈粉红色为阳性。 （4）应用
本试验有助于致病葡萄球菌与其他葡萄球菌的鉴别，前者呈阳性，后者呈阴性。 （五） 凝固酶试验 （1）原理
致病性葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集。葡萄球菌产生的凝固酶有两种，一种是结合凝固酶， 结合在细胞壁上，可用玻片法测出。另一种是游离凝固酶，此酶生成后释放于培养基中，可用试管法测出。 （2）方法
a 试管法：于无菌试管内加入兔血浆0.5ml ，再加入葡萄球菌16 ～18 小时肉汤培养物0.5 ml ，轻轻转动试管，使混匀。置37℃ 水浴中3 ～4 小时，结果观察， 凝固者为阳性。
b 玻片法：取未稀释的兔浆1滴及盐水1滴分别置于清洁载玻片上，挑取试验菌分别与盐水及血浆混合，立即观察结果。如血浆中有明显颗粒出现而盐水中无自凝现象者为阳性。结合凝固酶试验也可用纤维蛋白原致敏的红细胞与试验菌作玻片凝集试验，则更为敏感。若以血浆－IgG 双标记胶乳试齐可同时测定A 蛋白和纤维蛋白原的亲和因子，更可提高金黄色葡萄球菌的检出率，而且较简便快速。 （3）应用
用于鉴定葡萄球菌的种，金黄色葡萄球菌和中间葡萄球菌为阳性结果，其他葡萄球菌为阴性。 （六） DN A 酶试验 （1）原理
DNA酶可水解DNA长链，形成数个单核苷酸组成的寡核苷酸链。长链DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸可溶于酸。在菌落平板上加入盐酸后，若在菌落周围出现透明环，而其他部位呈浑浊，表示该菌具有DNA酶。 （2）方法
将待测菌在DNA 琼脂平板上做点状接种，经35℃培育过夜， 在平板加适量1 mol／L盐酸。观察在菌落周围有透明环出现，判为阳性结果，无透明环为阴性。 （3）应用
金黄色葡萄球菌及肠杆菌科中的沙雷菌、变形杆菌为阳性。
44．孤菌科包括哪几个菌属？
包括一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性的细菌，其有4个菌属：弧菌属、气单胞菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属。
45．与人类感染相关的弧菌有哪些？
01 群霍乱弧菌（V．cholerae O1 group） O139 群霍乱弧菌（V．cholerae group）
非O1 群霍乱弧菌（V．cholerae non －O1group） 副溶血性弧菌（V．parahaemolyticus） 霍利斯弧菌（V．hollisae） 拟态弧菌（V．minicus） 河弧菌（V．fluvialis） 创伤弧菌（V．vulnificus） 溶藻弧菌（V．alginolyticus） 少女弧菌（V．damsela）
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