发布时间 : 星期三 文章细胞生物学实验手册 - 图文更新完毕开始阅读
中有许多膜性结构形成扁平囊状或管泡状，密集成排的膜上附有颗粒，这就是粗面内质网。分散于细胞质中内质网间的许多圆形或棒状膜结构是线粒体。在核的四周可见小泡，扁平囊等集合形成的高尔基复合体。在细胞质中还可见一些不规则形的黑色致密结构是脂褐质，细胞质基质中分散存在纤细的微丝和微管是细胞骨架成份。
(时伟红编)
实验六 细胞生理活动的实验观察
【实验目的】
通过制片与观察加深理解细胞的运动、吞噬等生理活动。 【实验用品】
一、材料和标本 雄性蟾蜍、小白鼠、l％鸡血悬液、6％淀粉肉汤、草履虫。
二、器材和仪器 光镜、2ml注射器、载玻片、盖玻片、解剖器材、滴管、移液管、试管、玻璃片、黑纸。
三、试剂 0.3％台盼兰、1％刚果红。 【实验内容】
一、细胞的吞噬活动 (一)原理
白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。它们有许多生理功能，如游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物等。在白细胞中，以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强，故称此二类细胞为吞噬细胞。单核细胞由血液进入组织后逐渐演变成巨噬细胞。吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。吞噬细胞首先由于趋化作用而向异物游走，然后伸出伪足包围异物，并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞，继而溶酶体与吞噬泡融合消化异物。
(二)小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察
l．实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤O．5～1ml(含O．3％台盼兰，起标记作用)，以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞(此步由教师在实验前进行完毕)。
2．实验时，每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％鸡血悬液0．5～1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。
3．1小时后，用颈椎脱位法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹壁，向腹腔注入O．5ml～1ml生理盐水，用牙签轻轻搅拌使生理盐水与腹腔液混匀。 4．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后盖上盖片。 5．镜检，高倍镜下画图记录所见结果。 二、暗视野观察细胞的纤毛和鞭毛运动 (一)原理
暗视野照明法是一种不使照射被检物体的光线直接进入物镜的照明方法。常常用它来观察没有染色的活体细胞或胶体粒子。利用此照明法，在镜检时不能直接看到通过标本的照明光线，只有被检物体反射或衍射的光线进入物镜可以提高分辨率，在暗视野中可以看到明亮的被检物体的存在和运动，但它们的内部结构却看不清楚。
(二)自制遮光板变普通显微镜为“简单的暗视野显微镜”。
步骤：
1．将显微镜聚光器调到最高位，用低倍镜调焦至清楚。
2．取下目镜，从镜筒中观察并调节光圈的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。 3．放一块透明玻璃于载物台透光孔上，用尺子测量光圈孔径。
4．按照图6--1的形状，用黑纸剪成与调节后光圈孔径一样大小的中央遮光板。 5．将中央遮光板放置在显微镜的滤光框上，即可进行标本的暗视野观察。
注：如果使用高倍镜观察标本时，应按高倍镜调焦的视野大小重新制作中央遮光板。
图6—1中央遮光板
a．光圈孔径 b．滤光片直径
(三)观察蟾蜍上颌粘膜上皮细胞的纤毛运动 步骤：
1．用捣毁脑脊髓的方法处死蟾蜍。 2．腹部向上将蟾蜍固定在蜡盘上。
3．沿蟾蜍二侧口角向后剪开约l厘米，将下颌翻转固定在腹部。
4．在上颌中线距喉头1厘米处放置腊屑，观察腊屑向什么方向移动？记录腊屑开始移动到消失的时间(见图6--2蟾蜍口腔内面图)。
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5．然后，用眼科剪刀剪取咽头前部的上颌粘膜约232cm小块，用牙签挑取剪下的粘膜，将纵切面贴于载片上。
6．加一滴生理盐水于载玻片标本上，加盖玻片，镜检。
图6—2 蟾蜍口腔内面图
结果：
1．在低倍镜下观察上颌粘膜细胞纤毛运动的现象。 2．换高倍镜仔细观察纤毛有规律的运动。 (四)暗视野观察蟾蜍精子的鞭毛运动 步骤：
l．将前面实验所用蟾蜍沿腹中线开腹，暴露出黄色圆柱状精巢。
2．剪取一侧精巢于盛有自来水的平皿中，用镊子夹住精巢的一端，清洗去血污。 3．移取洗净的精巢于另一干净的平皿上，用眼科剪将精巢充分剪碎后，加入数滴自来水混匀。
4．用吸管吸取平皿内液体，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片，稍待2～3分钟于镜下观察。
结果：
1．在低倍镜下可见到视野中有许多精子：头部呈长锥形，尾为细长的线状结构。 2．置高倍镜下观察：可见有许多靠尾部鞭毛弯曲摆动驱使而运动的精子，测量鞭毛长度。
三、草履虫纤毛运动及食物泡的形成
图6—3 草履虫
草履虫是一种单细胞动物。虫体由一个细胞组成，能执行复杂的生理功能。
其体表，均匀密布纤毛，为运动细胞器。身体的前部有口沟，由前端斜向伸至体中部，口沟的底部为胞口，下部一短管斜向后部而入胞质，称胞咽。纤毛有规律的摆动使食物在胞咽聚结形成食物泡(吞噬泡)，最后脱离胞咽入胞质。食物泡随细胞质由体后端到前端不停环流，并与溶酶体(含酸性水解酶)融合，行使细胞内消化。
根据食物泡中刚果红指示剂的颜色变化(酸性时，为红色；近中性时，为黄色；碱性时，为蓝色)。可以观察到消化过程。 实验步骤：
1．取一滴草履虫培养液于载玻片上，放上几根棉花纤维，以减慢草履虫的运动。加盖玻片，制成临时装片。
2．观察草履虫的运动方式(观察时光线可调暗些)：可见镜下有许多样似倒置鞋底的草履虫，体表纤毛不断摆动，虫体以其中轴左旋前进，若遇阻力则试触后即刻回避而转向。 3．观察草履虫的食物泡的形成：
1)在盖玻片一侧加一滴l％的刚果红指示剂，用吸水纸从另一侧吸引使指示剂进入盖片下方，选一运动较迟缓的草履虫，移入高倍镜观察吞噬活动。 2)几分钟后可见草履虫体内出现许多红色食物泡，随着食物泡不停的在胞质中环流，食物不断消化，泡内酸性减弱或近中性，颜色渐渐呈黄色，食物泡渐小，最后食物泡颜色呈蓝