细胞培养念珠菌污染处理方法

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图11 霉菌污染的光镜检测

(典型的霉菌污染,肉眼看到白色的团块或白点,镜下呈丝状。400倍)

图12 霉菌污染的光镜检测(树枝状,高倍)

图13 霉菌污染的倒置显微镜检测(树枝状)

4. 杆菌污染:

培养基中加入抗生素可以减少此种污染,但也不是绝对的。

图14 杆菌污染的光镜检测(瑞氏染色,高倍)

图15 杆菌污染的光镜检测(瑞氏染色,低倍)

细胞中的颗粒到底是怎么回事?

我的细胞总有颗粒,开始是细胞中有,后来细胞之间也好像有许多颗粒。好像是细胞碎片一样。是什么东

西啊?是支原体污染吗?这可是我刚买回来的细胞啊!

我们实验室也有这种情况,是不是黑的小碎片,有人说是细胞代谢产物,后来拿到高倍镜下看还会动,就

怀疑是污染了,也想问问大家到底是什么

是黑色的小碎片。我没注意到它会动,只是觉得不像是活的微生物。我觉得是由于某种污染或外界因素导

致的细胞状态变差,裂解出的东西。但是,是什么东西不清楚。

的确很常见

在以前帖子见到说是“黑焦虫”。长时间培养的很容易出现,我根据自己的经验估计是一种污染,因为随着黑点增多,本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现,我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。不过增加换液次数的情况下,好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。 以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题,可以有条件换进口血清试试,或者离心一下也可能能

解决问题。那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊?有谁知道?

我培养的细胞也出现过此中问题,放到高倍镜下看时有东西在动,但培养液不混浊,估计不是细菌污染,

可能是血清问题,是支原体污染。

我培养的细胞也出现过这样的问题,我个人认为是一种支原体污染。国产血清是罪魁祸首,因为只要将细

胞饥饿一下,不超过24小时,这种东西就会疯长

我培养的细胞也有出现这中情况。但是并不影响细胞生长。应该不是支原体污染

最近,我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西,尽管我用的是GIBCO的FBS,后来,每天换液之前

洗几遍后,就慢慢变少,现在没了

细胞培养的细菌污染

我们新建的细胞室。每周都会做清洁,用0。2%新洁尔灭消毒,照紫外。实验前也会照至少30分钟。培养基中加青霉素,链霉素。可是培养细胞时还是常有细菌污染,有时甚至分析不出原因。用培养瓶还好一点,用多孔板或平皿就更凄惨。我养的是哺乳动物细胞,不知各位有什么好的方法避免污染!谢谢!

很可能是超净台无效了,,或者培养基? 其实严格操作箱污染都难

我们是新的超净台,不可能失效。而且用同一瓶培养基,一瓶传两瓶,原始的一瓶污染,

新传的很好。所以我分析不出原因呀 那么假如把原始的那瓶换新瓶养可以么? 都污染了,我仍还来不及,那还敢换新瓶

染菌有很多原因,因为整个细胞操作过程均要求无菌,所以看看操作是否规范,例如戴手套等。 多半是环境因素,做点平板,操作时放在几个地方,培养后看看长菌情况。消毒用新洁尔灭好象不是太有

用。

人是最大的污染源,不知你做好手部的消毒工作以及戴口罩没有,其实,只要你操作的好,严格在靠近火的附近操作,污染的几率是很小的。从你的描述中可以看出培养基应该没有问题,新的一瓶很好,老的一

瓶污染,只有操作不当引起的,还需要加强练手。

求助!关于细胞培养中的真菌污染!感激!

先谢谢大家的帮助!现在细胞培养基里出现了很多白色和黑色的小点,有好长的时间了!细胞的形态看起来不太好,但是有些细胞也长的很好,如成纤维细胞,但是内皮细胞就差很多!加大量的抗生素没有效果!不知道是不是真菌污染,怎么鉴别!因为培养了很长时间都没有出现真菌的菌丝,所以不能肯定是真菌!那些白色的小圆点有点象白色链球菌或链珠菌,但是不能确定!怎么样才能判断确定,改用什么办法解决!

谢谢大家的帮助!

杀灭真菌听说用两性霉素,但从没试过。真菌污染是件很麻烦的事,可能重新复苏细胞是最好的办法。同

时该注意如何防止污染。

我觉得如果是真菌污染,培养基会浑浊,是肉眼可见的浑浊。在这种情况下最好赶紧将该瓶细胞扔掉,免得引起培养箱中的大规摸污染。在显微镜下,真菌是成念珠状的,这时细胞界限不清。这可能是不规范操

作引起的,安全起见还是将细胞室全面打扫一下,用新洁尔灭擦,紫外照!

谢谢大家的帮助,因为实验室以前从来就没有这样的污染,所以大家也没有经验!现在就是不能确定是不是污染。我不可能把实验室所有的细胞都扔掉,因为有好多人都在一起养不同类型的细胞!现在确实是问

题,培养基也没有浑浊,操作的时候已经十二分的小心了!

我想问一下,你看到的那些白色或黑色的圆点是在低倍还是高倍显微镜下?若培养基不混浊,可能真的是细胞状态太差,没有贴壁还缩成球状。难道你们实验室所有细胞都用一瓶培养基?只要将污染的扔掉就行,

没必要都扔掉!

两性霉素!sigma在华美有分装!但是浓度很小,关键还是环境问题!

黑白圆点在100倍显微镜下有多大,是不是酵母菌

小黑点和小白点是在200倍的显微镜下观察所见,大小可能是细胞核的1/5到1/4左右!细胞状态不好是因为跟以前培养的细胞来比较所得,细胞能贴壁,能生长,但是没有以前的那么快,而且形态看的也不好!

另外问一下sleevexz,酵母菌是什么样的,怎么鉴别!

还有一个问题就是,实验室用的双抗是从Gibco公司买过来的直接使用的液体,具体规格是100ml一瓶,Pelicillin-Streptomycin 一起,50倍的,要求储存在-20 C,但是有效期只到2002年9月,现在都已经差不多过期半年了,但是实验室的老师都说没有问题,可以用,现在大家就都是一直用这样的抗生素在!你

们说会不会是抗生素的问题的!

养细胞经常无缘无辜的染菌?烦烦烦!!!!我是一个新手,但已养细胞近半年,最近一段时间经常染菌,有时是培养基,有时连原因都找不到,在实验中我也非常小心,但结果总让我伤心。现在都有点神经

质了,请各位指点

你这个问题说大不大,说小也不小。说不大呢,七个字就可以回答你:严格按照无菌要求。说不小呢,这无菌要求的话匣子一打开太大。还是简要吧:1.将试验用品放入超净工作台用紫外线照射30分钟;2. 照射30分钟后,进入缓冲间,换灭菌的无菌衣,换专用拖鞋;3.手部用5%的洁尔灭浸泡2分钟,进入洁净区后,用75%的酒精棉球再次擦拭裸露的手部。4.最好戴口罩;5.操作时尽量靠近火焰;6.装培养基的瓶子等不要直接口向上,用一个架子斜放,瓶口朝向火焰;7.标准操作,不要让无菌吸管到处碰来碰去;8.

中途出入无菌室,再次操作时,一定要再次用75%的酒精棉球消毒。

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