发布时间 : 星期二 文章山西农大生化试验全部复习资料和答案更新完毕开始阅读
经过40min钟电泳，染色脱色后，从阳极到阴极的排列顺序如何？
3、. 影响蛋白质电泳分离效果的主要因素有哪些？
4、.琼脂糖凝胶电泳技术方法一般常用来分离分析何种生物大分子？ 5.常见的凝胶电泳还有那些介质或支持物？ ㈡操作与技术
1.电泳技术涉及其主要仪器或设备有哪些？
2.电泳试验中，点样量的多少对分离结果可能会产生怎样的影响？
3.电极缓冲液及载体（醋酸纤维膜或凝胶）的pH值与缓冲能力对蛋白质分离是否会产生影响？简单讨论。
4.商用的醋酸纤维薄膜（2×6cm）在点样之前应该进行怎样的前处理？
5.醋酸纤维膜电泳分离人血清蛋白过程中所用的电极缓冲液是什么？该缓冲液的pH值是多大？如果该缓冲液的pH如果是12.0或者是4.0，可能会对人血清蛋白质电泳结果产生怎样的影响？
6. 醋酸纤维薄膜电泳分离人血清实验方法中，电压正常范围是多大？电压过大会造成什么样的结果？
电泳电压的大小，时间的长短与缓冲液的离子强度都有一定的关系。一般电流约0.4~0.6mA/cm’，电压110~160V，通电时间40~60min。电压高，电流大，电泳速度加快，时间缩短，但薄膜上蒸发严重，因此不能无限增大电流。
7. .醋酸纤维薄膜电泳分离人血清实验方法中，染色液成分是什么？ 透明液：95%乙醇80ml，冰醋酸20ml混合。
8.醋酸纤维薄膜电泳分离人血清实验方法中，透明液成分是什么？ 冰醋酸：无水乙醇25：75 二、
维生素C的测定
1.指出本实验采用的定量测定维生素C的方法有何优缺点？ 优点：简便易行，快速，比较准确。
缺点：易受其它还原物质干扰，滴定终点难以确定。 2. 2,6-D的作用是什么？ A.氧化剂的作用。还原抗坏血酸。
B．作为指示剂，判断滴定终点，以计算样品含量 3.用2%草酸提取样品的目的是什么？ 4.本实验中设计的空白试验的目的？
三、纸层析分离氨基酸
1 为什么苯丙氨酸的Rf值大于赖氨酸
因为水与滤纸的吸附性很强，故扩散的慢，邮寄溶剂与滤纸吸附性差，故扩散的快。苯丙氨酸是非极性氨基酸，其易随着有机溶剂一起扩散，而赖氨酸正好相反。故最后苯丙氨酸走的更远些，因而使苯丙氨酸Rf较大些。
2为什么脯氨酸和茚三酮加热后是黄色斑点
脯氨酸等伯胺氨基酸与茚三酮反应可生成黄色化合物。
3说明纸层析和离子交换层析分离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性质? 列出纸层析和柱层析的一般操作步骤。
纸层析：点样、层析、标记前沿、烘干、显色、得到层析图谱、标记色斑 柱层析：装柱、平衡、上样、洗脱、收集、检测、测定
4什么是分配系数？
5.氨基酸纸层析系统（层析液）的成分及比例？ 6. .氨基酸纸层析喷茚三酮显色时应注意些什么？
四、双缩脲法测定蛋白质的含量
1． 双缩脲法定量测生物材料中蛋白质是否适合所有样品？
不是；样品中蛋白质含量在0.5~5mg/ml才能用双缩脲法测定。如新鲜的植物叶片植物块茎蛋白含量低。
2．试验中加入四氯化碳的作用？ 3．普通离心机使用时应注意什么？
对称平衡。放离心管于离心机之前，应该首先将两个离心管配平，然后放在对角线上。 缓慢加速。开机时要首先检查速度应该调到最小开机后应该将速度慢慢往上调。 4、722型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？ A=kLc 吸光度（A）浓度（c）K吸光系数 L 比色杯=1cm ） 单色光通过均匀的溶液吸光度与浓度成正比。
分光光度计应该先预热20min。定波长。用参比液进行T调0，盖上盖子T调100→然后将选择档放在A上，将A值调0.000(如果是 -0.000 ，可按AO旋钮即100)→然后拉动拉杆，使样品杯置于光路中，测定其吸光度值。操作空档间样品池的盖应打开，否则光电管疲劳，仪器不能正常运行。连续操作不能超过2h，到时关闭电源0.5h后再启动。
5、比色测定时为什么要设计空白管？参比液，消除试剂误差。
6、紫外吸收法测定样品蛋白含量时，若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？ 校正:计算待测蛋白质溶液的OD280/OD260比值后，查(紫外分光光度法测定蛋白质含
量校正数据表）校正因子“F”值，根据经验公式--蛋白质浓度(mg/ml)=F×1/d×OD280×D计算该溶液的蛋白质浓度；D-溶液的稀释倍数，d比色杯的厚度（cm）
五、酶活力的测定
1、制作标准曲线及测定样品时，比色前对试管内溶液有何要求？摇匀，单色光通过均匀的溶液吸光度与浓度成正比。
2、淀粉酶的最适pH，最适温度，底物及抑制剂各是什么？
麦芽淀粉酶的最适 pH5.6、最适温度 40℃、最适底物 淀粉、抑制剂DNS（2mol/L NaOH配制的）
3、如何正确绘制和使用标准曲线?
标准曲线应在坐标纸上绘制，横坐标轴距坐标纸底边1.5~2cm，标示出刻度和样品浓度的单位；纵坐标轴距坐标纸左边1.5~2cm，标示刻度和光密度值；曲线为过原点的直线，测定点均匀分布在直线的两侧；标准曲线只能在测试条件完全相同的情况下，用于确定样品中的物质含量。对于重复的测定，应取吸光度的平均值查标准曲线；测定数据不应记在标准曲线上。
4、将淀粉酶原液置70℃水浴中保温的作用是什么？要测定β淀粉酶活性需把淀粉酶原液置于什么条件？
5、酶的活力一般如何表示？初速度，单位时间内底物的减少量或产物的增加量。 6、还原性糖显色反应的反应条件是什么？碱性，煮沸。 六、核酸测定
1. 制备的DNA在什么溶液中较稳定?
2. 为了保证植物DNA的完整性，在吸取样品、抽提过程中应注意什么？ 3. 本实验所用的CTAB、氯仿、异戊醇各自的作用是什么？ 4 提取DNA的纯度、浓度和完整性检测方法有哪些，分别怎么检测。
5、DNA提取液中CTAB的作用？十六烷基三甲基溴化铵。是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜。
6、如何使用简单的实验方法检测DNA纯度？ 7、提取DNA要掌握的基本思路及原则？
752型紫外可见分光光度计的操作
1．打开电源,机器自检. 按上下键定波长。
2．自第2个比色池开始，依次装参比液、样液。盖上盖。
3．按mode到T,调0%，显示zero，调100%，显示blank直到100%。 4．按mode到A，调0%，显示zero，
5．拉动拉杆，使样品杯置于光路中，测定其吸光度值
TCL-20Ml冷冻离心机操作
1、开机，盖上盖，自动降温4℃。开机盖是拉侧面的旋扭。
2、对称平衡。放离心管于离心机之前，先将两个离心管配平，然后放在对角线上。 3、按set，鼠标红点所在的地方，按上下键调速、温度及时间、开始。 4、取出离心管，盖好盖。