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分 子 生 物 学 实 验
教 案
（2010～2011学年 第一学期）
任 课 教 师： 技 术 职 称： 授 课 对 象：2008级生物科学/技术 使 用 教 材： 刘进元主编 教 研 室 ： 实 验 中 心
河 南 大 学 生 命 科 学 学 院
2010 年 9 月 1 日
分子生物学实验教案
分子生物学实验 教案
课程名称 总学时数 36 分子生物学实验 任课教师 何艳霞 学分 1 授课对象 2008级生物科学、技术 实验项目名称与学时分配 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 项目名称 质粒DNA的提取和纯化 DNA浓度和纯度的测定 琼脂糖凝胶电泳检测DNA PCR扩增获取目的基因 DNA酶切 目的DNA的回收 目的基因与载体的体外连接 大肠杆菌感受态细胞的制备 大肠杆菌感受态细胞的转化 重组子的筛选 PCR鉴定重组子 酶切鉴定重组子 表达载体的构建 （选修） 外源基因的诱导表达 （选修） SDS-PAGE检测目的蛋白 （选修） 分子生物学实验指导， 学时 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 使用教材 1． 朱旭芬，史锋，赵小立等编著，《基因工程实验》，浙江大学生命科学学院全国生物技术实验师资培训教材，2004。 教学参考资料 2． 魏群主编，《分子生物学实验指导》，高等教育出版社、施普林格出版社，1999。 3． 吴乃虎编著，《基因工程原理》，高等教育出版社，1997。 4． [美]J.姆布鲁克等编著，《分子克隆实验指南》，科学出版社，2002。
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分子生物学实验教案
《分子生物学实验》简介
分子生物学实验是根据基因工程的本质而设计的一门综合性和设计性的实验课程。本实验课程涵盖基因的主要操作过程，由内容相关的一系列实验组成，强调实验的连续性和一体化，包括目的DNA片段的PCR扩增及电泳鉴定，质粒DNA的抽提、纯化及电泳鉴定，质粒DNA的限制性内切酶酶切及体外连接，感受态细胞的制备及转化，转化子鉴定及接种培养，重组质粒抽提、纯化、酶切与及检测及重组蛋白表达分析等实验。通过本课程学习，使学生学习和掌握分子生物学中常用的各种实验技术，包括培养学生形成正确的实验操作习惯，正确地使用各种实验仪器与试剂、详细记录实验的过程与结果、对实验中所出现的问题做合理的分析，培养学生分析问题和解决问题的能力。
该课程自设置以来不断进行实验内容的调整和改进，并在实验运行机制和课时设置方面进行了大胆的尝试和革新，既让学生自主地设计实验技术路线、实验材料准备、实验操作和结果分析，发挥学生的主动和创新意识，增加对实验的兴趣和认识，又让学生学习和熟悉科研课题研究思路，达到掌握开展科学研究的方法和具体实验操作的目的。
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分子生物学实验教案
分子生物学实验计划表
细菌的培养 质粒提取( PUCATPH，pBSKS，pGEX-2TK PET28c ) DNA浓度和纯度的测定 琼脂糖凝胶电泳检测DNA PCR扩增（PUCATPH）获取目的基因序列 PCR产物的酶切、电泳确定； 酶切克隆载体pBSKS、电泳确认； 试剂盒回收目的基因条带； 试剂盒回收酶切过的克隆载体 目的基因与pBSKS载体的体外连接 制备感受态宿主菌， 重组质粒热击转化感受态细菌DH10B 蓝白斑选择筛选转化子 挑取白色单菌落，扩大培养；蓝斑作对照 菌液PCR扩增 提取质粒，酶切质粒
电泳检测重组子插入片断大小，确认正确插入的重组子
检测表达情况 诱导目的基因表达，转化子筛选 目的基因片断与表达载体体外连接 酶切表达质粒PET28c 电泳回收表达载体片断 感受态制备，连接产物转化感受态细胞BL21 说明： 本程序基本涵盖了基因工程的整个实验流程，包括目的基因的获得，克
隆载体的构建，表达载体的构建，载体和目的基因的连接、转化，重组子的筛选、目的基因的诱导表达。限于我们的实验条件，感受态细胞的的制备和目的基因的表达可能比较粗放，请大家谅解。
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