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实验十 离体心脏灌流：某些因素对离体心脏的影响
实验原理 心脏离体后，如用人工灌流的方法维持适宜的理化环境，使其新陈代谢能顺利进行，则心脏仍能有节律地收缩、舒张，并可保持较长的时间。离体心脏活动所需的灌流液应同动物的内环境一致，改变灌流液的成分，则可引起心脏活动的改变。心脏的活动亦受植物性神经支配，因此，在灌流液中施加相应的神经递质，也可改变离体心脏的活动。
实验目的 学习斯氏离体蛙心灌流法，了解离体器官的研究方法；观察不同阳离子（钠、钾、钙）、肾上腺素和乙酰胆碱对心脏活动的影响。 实验对象 蛙或蟾蜍
实验器材和药品 计算机、生理学与神经生物学实验系统、机械换能器、蛙类手术器械、斯氏蛙心插管、蛙心夹、支架、双凹夹、试管夹；任氏液、５％ＮaＣl、２％ＣaＣl2、１％ＫＣl、0.01％去甲肾上腺素（ＮＥ）、0.01％乙酰胆碱（ＡＣh）。 实验步骤和观察项目
一、毁蟾蜍脑和脊髓，仰卧固定于蛙板上，暴露心脏（方法同实验七）。
二、心脏插管 在右主动脉下穿一根线，打一活结备用。在左主动脉下穿两根线，将一线于距动脉圆锥约１cm处结扎，另一线打一活结备用。注意不要将线缠在一起。提起左主动脉上的结扎线，用眼科镊在左主动脉距动脉圆锥合适处沿向心方向剪一斜口（注意不要将左主动脉剪断），将盛有少量任氏液的斯氏蛙心插管由此口插入左主动脉，并进入动脉圆锥，而后略向后退，在心室收缩时向心室后下方推进，通过主动脉瓣插入心室腔（不可插入过深，以免心室壁堵住插管下口）。此时可见管中液面随心搏而上下移动。随时吸去管中血液，更换新鲜任氏液。然后用左主动脉上的备用线扎紧插管，并固定于管侧壁的小钩上。剪断左主动脉，结扎右主动脉上的备用线，于远心端剪断右主动脉，轻轻提起插管，在心脏下方绕一线，将左右肺静脉、前后腔静脉一起结扎（切勿扎住静脉窦），提起结扎线，于结扎处下方剪去所有相连的组织，将心脏离体。
用新鲜任氏液反复换洗心室内的余血，直至液体完全澄清，以防血液凝固而堵塞插管。保持灌流液面高度恒定（约１cm），即可进行实验。
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图10－1记录离体心脏收缩曲线的实验装置示意图
三、如图10－1连接实验装置，固定机械换能器时将其略向下倾斜，参数设置： 放大器：首先根据实验选择通道，如图10-1信号输入接入3，通道选3，通道只能选择一个；放大倍数几百倍（根据实验要求选择），时间常数DC，滤波1KHz；采集卡：采用连续模式，采样间隔12500us。。
四、按如下步骤进行实验记录和观察：
⒈记录正常心搏曲线。记下液面高度，以下各步中均应与此保持相同。
⒉记录一段正常心搏曲线，向插管中加入１～２滴５％ＮaＣl溶液，同时在界面加样控制里填入所加药品名称做给药标记，这时记录图形变色，标记成功；观察记录心搏曲线的变化，待出现明显效应后，立即吸出灌流液，用新鲜任氏液换洗直至心搏曲线恢复正常，同时在界面加样控制里填入清洗，这时记录图形恢复原来颜色，换洗标记成功；记录一段换洗后的变化，再停止采样。
⒊加入１～２滴２％ＣaＣl2溶液，按步骤２观察记录心搏曲线的变化。 ⒋加入１～２滴１％ＫＣl溶液，按步骤２观察记录心搏曲线的变化。 ⒌加入１～２滴0.01％ＮＥ，按步骤２观察记录心搏曲线的变化。 ⒍加入１～２滴0.01％ＡＣh，按步骤２观察记录心搏曲线的变化。 五、对所观察的实验现象进行讨论。 注意事项
⒈每次换液时，插管内的液面高度应保持一定，切不可使空气进入心室，以免形成气栓。 ⒉加实验溶液时，先加１～２滴，如作用不明显可补加。 ⒊每步实验均应有前后对照。
⒋各实验溶液的专用滴管用毕还原，不可混淆。
⒌实验次序可根据心搏情况进行调整。如心搏很慢很弱，可先滴加ＣaＣl2或ＮＥ，待心搏较强时，用新鲜任氏液换洗至心搏稳定，再按以上步骤进行实验。 ⒍随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。
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⒎固定换能器时使其头端向下倾斜，以免滴下的液体流入换能器内引起短路。 思考题
⒈实验过程中为什么要保持一定的灌流液液面高度？
实验十一 心血管活动的神经体液性调节
实验原理 正常情况下，人和动物的动脉血压是相对恒定的，这种相对恒定是通过神经、体液和自身调节机制调节心脏和血管活动而实现的。在异常情况下，如应激、应急情况时，动脉血压也会有相应的变化以适应环境的改变。神经调节是中枢神经系统通过反射调节心血管的活动，最后影响到动脉血压的水平。心血管的活动还受许多体液因素的影响，它们同样对动脉血压具有调节作用。如果改变内外环境的某些因素，动脉血压就会发生相应的变化。
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本实验采用的是直接测定血压的方法。通过动脉插管，经液压传动系统，由血压换能器将血压变化转换为电信号记录在仪器上。
实验目的 学习直接测定和记录动脉血压的急性实验方法，并以动脉血压为指标，观察整体情况下一些神经体液因素对心血管活动的调节。 实验对象 家兔
实验器材和药品 计算机、生理学与神经生物学实验系统、血压换能器、保护电极、动脉插管、双凹夹、支架、试管夹、三通管、兔手术台、哺乳类手术器械（手术刀、手术剪、镊子、止血钳、动脉夹、气管插管、玻璃针、滴管、烧杯、线、棉花、注射器）、纱布；20％氨基甲酸乙酯（Ｕrethane，乌拉坦）、3.8％枸橼酸钠、生理盐水、肝素（300单位／毫升）、0.01％去甲肾上腺素、0.01％肾上腺素、0.01％乙酰胆碱。 实验步骤和观察项目
一、 安装实验装置（图11－1）：
图11－1：动脉血压记录装置示意图
⒈血压换能器 将血压换能器的两个小管分别与三通管连接，其中一个三通管通过乳胶管与动脉插管相连，旋动三通管的旋柄使血压换能器通过动脉插管与大气相通。用注射器将3.8％枸橼酸钠通过另一三通管缓慢注入血压换能器和动脉插管内，将其中的空气排尽，关闭该三通管。将血压换能器与二道生理记录仪的血压放大器相连。血压换能器固定的位置应与动物的心脏处于同一水平。
⒉参数设置
刺激器：单脉冲输出、复刺激、波宽＜0.2ms、频率为10～15Ｈz、强度为10Ｖ。 放大器：选择通道，如图11-1信号输入接入3，通道选3，通道只能选择一个；放大倍数几百倍（根据实验要求选择），时间常数DC，滤波1KHz。
采集卡：采用连续模式，采样间隔12500us。实验前应进行定标。 二、手术准备
⒈麻醉 动物称重后，从耳缘静脉缓慢注入20％氨基甲酸乙酯（５ml／Ｋg体重），注射过程中注意观察动物肌张力、呼吸情况及角膜反射的变化，防止因麻醉过深而造成动物死亡。 ⒉将动物仰卧固定，剪去颈部手术野的被毛。
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