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烟草的再生
前言：广义上的植物组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组
织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。 狭义上的植物组织培养指用植物各部分组织，如形成层。薄壁组织。叶肉组织。胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。目前广泛应用于科研及生产上的一种技术手段。
实验目的：对植物组织培养原理及过程有一个初步的了解，学习实验过程中
的各种操作和方法。
实验原理：一个植物细胞能产生一个完整植株的固有能力称这为细胞的全能
性（Cell totipotency）。换句话说，细胞全能性是指植物细胞具有全套遗传信息，不管是性细胞还是体细胞，在特定环境下仍能进行表达，而产生一个独立完整的个体。
细胞一旦脱离了母体植株，拜托了原来所受到的遗传上的控制和生理上的制约，在一定的培养条件下，就会发生一种回复变化，从而失去分化状态，变为分
生细胞，实现脱分化过程。然后，这些脱分化细胞经过连续的有丝分裂，形
成愈伤组织，即指在人工培养基上外植体长出来的一团无序生长的薄璧细胞。 脱分化细胞不断进行分裂，从而形成了愈伤组织，愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。这个过程叫做继代。
当试管苗在瓶内长满并长到瓶塞，或培养基利用完时就要转接，进行继代，可迅速得到大量试管苗，以便到一定数量时进行移栽。能否保持试管苗的继代培养，是能否得到大量试管苗和能否用于生产的重要问题。
因此，按培养过程可分为初代培养和继代培养两种类型： （1）初代培养（Primary culture）：指外植体的最初培养。
（2）继代培养（Subculture）： 将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这种反复多次移植的培养，称为继代培养。 若按照组织培养的材料可分为：
（1）组织、器官或细胞培养：指利用生物体各部分组织、器官或细胞进行离体培养，使之形成愈伤组织或完整有机体的技术。
（2）原生质体培养：指将微生物或植物细胞游离成原生质体，在适宜培养条件下，依据细胞全能性使其再生细胞壁，并进行细胞分裂分化，形成完整个体的技术。
植物组织培养过程为：
离体的植物器官、组织、细胞 脱分化
愈伤组织 再分化
根 芽 再生植株
实验材料介绍：
烟草(Nieotiana tabacum L．)，属茄科(Solanaceae)烟草属(Nicotiana)一年生草本植物．烟草含有尼古丁，是一种生物碱，具有神经毒性，尤其对昆虫是致命的，但可以刺激人类神经兴奋，有很强的成瘾性．有的烟草也可以用来制造杀虫剂，提取烟碱、苹果酸、柠檬酸?等．烟草是重要的经济作物和工业原料作物 ，其体内所含的烟碱等生物碱是非常宝贵的医药及化工原料。最近证实可利用烟草细胞悬浮培养物获得细胞分裂素类物质。
目前，烟草一般采用有性繁殖，但繁殖的烟苗不均衡，易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，从而影响经济收入．而通过组织培养技术，可以保持烟草优良品种的优良性状，减少病虫害，从而达到高产优质的目的．有关烟草组织培养已有不少报道，主要体现在以烟草叶片作为外殖体，近几年研究重属对烟草中片组织培养的影响也有部分报道”．
实验材料和仪器：
材料：烟草叶片，MS培养基所需的各类药品，蔗糖，固体琼脂，1mol/L的NaOH，70%酒精，升汞溶液，蒸馏水
仪器：无菌操作台，锥形瓶，镊子，解剖刀，酒精灯，电子天平，烧杯，高压蒸汽灭菌锅，刀片，培养皿，量筒，培养箱，牛皮纸，玻璃棒，漏斗
实验方法与步骤：
1.母液的配制
准备好配制MS培养基所需要的各种药物和器材，计算好各种药品所需的量，准备足量的蒸馏水。
MS培养基配方（单位：mg）
大量元素（母液Ⅰ）
成分 NH4NO3 KNO3 MgSO4·7H2O KH2PO4
微量元素（母液Ⅱ）
成分 KI H3BO3 MnSO4·4H2O 称取量 称取量 （母液100ml） （母液1000ml） 扩大倍数 配1L吸取量（ml） 称取量 称取量 （母液200ml） （母液1000ml） 扩大倍数 配1L吸取量（ml） 16500 19000 3700 1700 82500 95000 50× 18500 8500 20 16.6 124 446 166 1240 4460 200× 5 ZnSO4·7H2O Na2·MoO4·2H2O 172 5 0.5 0.5
1720 50 5 5 CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 铁盐（母液Ⅲ）
成分 Na2·EDTA·2H2O FeSO4·7H2O
有机物（母液Ⅳ）
成分 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇素（B6） 盐酸硫胺素（B1） 甘氨酸 称取量 （母液100ml） 称取量 （母液1000ml） 扩大倍数 配1L吸取量（ml） 称取量 称取量 （母液100ml） （母液1000ml） 扩大倍数 配1L吸取量（ml） 746 556 7460 200× 5560 5 2000 10 10 2 40 20000 100 100 20 400 200× 5 钙盐（母液V）
成分 CaCl2·2H2O 按照以上配方进行称取药品，母液一和五需配制200ml，母液二三四需配制
称取量 （母液200ml） 称取量 （母液1000ml） 扩大倍数 配1L吸取量（ml） 2200 22000 50× 20