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α—硫辛酸诱导氧化应激下人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶—1
作者：毛少伟 卿晨 邹桂花 罗甜 谭钢
来源：《健康之路（医药研究）》2014年第01期
【摘要】目的 观察仅α硫辛酸（ALA）对外源性H202诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞表达血红素氧合酶（HO-1）的影响，并探讨其可能的分子机制。方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞，用12.5mmol/L外源性过氧化氢（H2O2）作用30min后，再加入不同浓度ALA作用不同时间。RT-PCR和Western blot分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达。荧光探针法观察ROS的产生。同时分别采用HO-1的激动剂CoPP和抑制剂ZnPP处理细胞，观察ROS的变化。结果 ALA处理ARPE-19细胞后，可显著诱导其表达HO-1 mRNA和蛋白，并呈一定的剂量依赖性。同时，H2O2处理后能显著诱导ARPE-19细胞产生ROS，而经不同浓度ALA处理后，ROS产生显著降低。结论 α-硫辛酸诱导氧化应激下人视网膜色素上皮细胞表达HO-1，从而抑制ROS的过度产生。 【关键词】α-硫辛酸；氧化应激；血红素氧合酶-1；活性氧
年龄相关性黄斑变性（Age-related Macular Degeneration，AMD）是一种随年龄增长出现的双侧、进行性视网膜黄斑部退行性病变，是发达国家最常见的不可逆性致盲眼病，也是我国50岁以上人群中最重要的致盲性疾病之一。AMD的病理改变主要累及视网膜色素上皮（RPE）、感光细胞层和脉络膜界面。RPE细胞都是病变的中心环节之一，RPE具有很高氧化应激易感性。因而长期氧化应激导致的RPE细胞结构与功能异常被认为是引发AMD的重要原因。α硫辛酸（alpha lipoic acid，ALA）是一种理想的生物抗氧化剂，它广泛存在于自然界中，具有强大的抗氧化作（是维生素C的400倍），也是存在于线粒体内的辅酶，生物相容性和利用度很好[1]。本研究试图证实ALA对氧化应激下RPE细胞的保护作用，并初步探讨其机制。
1 材料与方法 1.1 主要实验试剂
荧光染料H2DCFDA购自Molecular Probes公司。H2O2、钴原卟啉 IX（CpPP），锡原卟啉IX（SnPP）为Sigma-Aldrich产品为Sigma产品。HO-1多克隆抗体购自Santa Cruz。RT-PCR试剂盒购自大连宝生物。其余分析纯产品主要购自上海生物工程有限公司。 1.2 细胞培养与处理