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山东大学实验报告 2015年 5 月 31日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者
科目 细胞生物学实验 实验题目 染色体标本制作与观察
结果分析：
本实验采用的是小鼠的睾丸细胞，在40倍镜下观察，视野中可见许多未成熟的精子（如图1），另外能够找到很多处于分裂间期和前期的染色体，其凝集程度不是很高；分析可知，处于减数第一次分裂的中期的细胞是二倍体，可观察到20对即40条染色体，有些在进行减数第二次分裂中期，这样的细胞是单倍体，应有20条染色体。
观察中会出现少于20条染色体的情况，或者多于20条少于40条的情况，可能原因： 1）在制备细胞悬液过程中有染色体的丢失。如用吸管吹散细胞时用力过大造成细胞破裂， 使得染色体弥散在溶液中，在随后的离心中将会丢失。
2）在距离载玻片一定高度滴片时因高度过高，使得染色体过于分散而导致丢失。 3）滴完片在敲打载玻片的过程中导致染色体的丢失。
4）染色时，由于在染液中染了30min，部分染色体可能会随染液丢失。
实验中没有观察到完全展开好的染色体，染色体大多呈棒状而不是V字形，这说明在对染色体展平的步骤没有做好，以后应改进。
做好本次实验的关键步骤：
1）低渗处理过程。低渗溶液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度，细胞会破裂；低渗不足则染色体聚在一起分散不开。
2）离心速度以及离心时间也能影响染色体标本的制备。离心速度过大或离心时间过长,则会引起细胞破裂；反之,离心速度过小或离心时间过短,则细胞沉降不下来,则会引起大量细胞的丢失。
3）固定液要随用随配。固定彻底后再打散细胞团块，否则细胞容易破碎，染色体分散亦受到影响。
4）用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔。用力过大则会造成细胞破裂，而染色体也会弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。
5） 载玻片要预冷。拿出预先冰好的载玻片后要立即滴加细胞悬液，这就需要在拿载玻片之前先用滴管吸好液体，若玻片的冷却温度不够，则会影响染色体的附着和铺展。
6) 滴片时的高度很重要。高度过低细胞不会破裂，过高则染色体过于分散甚至丢失,无法辨
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山东大学实验报告 2015年 5 月 31日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者
科目 细胞生物学实验 实验题目 染色体标本制作与观察
别出染色体的准确数量。 在观察中还发现，视野中细胞不是很分散，存在大量细胞团，这可以归结为多方面原因。首先，如果在剪碎组织时没有剪好，则会导致细胞匀浆中含有大量细胞团，由于这些细胞聚集在一起，就有一定的组织强度，十几厘米的高度很难摔碎。其次，如果低渗不完全，细胞可能膨胀程度不够，很难摔碎。再次，如果混匀细胞时没有完全混匀，则会导致细胞聚集在一起，敲细胞时很难敲碎，同样观察不到理想的效果；如果吹得太用力，则会导致细胞被吹碎，视野中有大量细胞碎片，影响观察。最后，如果滴片时的高度不够，细胞分散不好，也很能破碎，染色体也就不能很好地展开。 【注意事项】
1、注射秋水仙素：应选择腹腔注射，如果观察到小鼠被注射后皮肤隆起，则表明注射到皮下，应重新注射；如果在拔出针时观察到有血珠溢出，则是因为注射时损伤了部分器官或血管，秋水仙素会随血液传递到全身，其传递速度会加快，其死亡时间可能小于15-16h，应随时观察小鼠，以防其突然死亡。即使注射到小鼠的腹腔中，也很有可能注射到起脂肪组织中，使小鼠的死亡时间变慢。因此应根据具体实验，适当调整注射时间和等待时间。
2、处死小鼠：最好选择在小鼠将要死亡时处死小鼠，因为此时，秋水仙素的作用发挥到最大，分裂期中期的细胞最多；如果等小鼠死亡后处死小鼠，小鼠尸体可能已僵硬，难以取到精巢。 3、剪碎组织：可以取少于1mL0.3% KCl溶液，没过杯底即可，如果液体太多则很难剪到组织，比较浪费时间。
4、铜网过滤：应把组织尽量剪碎后再用铜网过滤；如果烧杯中仍有较大颗粒，则小心不要把那些颗粒倒出，在烧杯中再加入少量0.3% KCl溶液，继续剪；如果铜网上还有很多比较大的颗粒，先用少量0.3% KCl溶液将其冲入烧杯，再进行剪碎。
5、实验步骤中的（4）所提到的30min包括（5）中的离心配平时间，因此，真正的静置时间应少于30mins，细胞与0.3% KCl接触的总时间应为45mins左右。
6、离心：离心的转速是800-1000r/min，这样低的转速是为了防止细胞破裂。
7、再次离心和固定：这样做是因为第一次离心之前细胞经过了低渗处理，虽然抽去了上清液，但是不可能抽干净，因此，再次离心保证细胞离开低渗环境。
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山东大学实验报告 2015年 5 月 31日
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者
科目 细胞生物学实验 实验题目 染色体标本制作与观察
8、吹散细胞：应该轻轻地吹细胞，如果太用力会导致细胞破裂。
9、摔碎细胞：摔碎细胞时应注意滴管与载玻片的距离，如果距离太小，则细胞很难摔碎，不会观察到染色体；但如果距离太大，会使细胞完全的碎开，染色体布满视野，虽然观察到染色体，但不能明确分出哪些是同一个细胞的，会给计数造成一定的难度。
10、染色：染色之后应冲去染液并晾干，注意使用小水流并从背面冲洗，这样可以避免冲去细胞。
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