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表达。
穿梭载体：
质粒的迁移：有一些非接合型质粒在接合型质粒的帮助下，从一个细胞转移到另一个细胞的作用称之为质粒的迁移性。
载体需要满足的条件/具有的特点 低分子量； 选择标记；
高拷贝的宿主细胞；
复制序列（复制起始位点）；
有多个限制酶的识别位点且切点是单一的，供外源基因插入； 较高稳定性，可以稳定遗传不易丢失； 安全性； 扩增。
质粒的不相容性
在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒是不能在同一宿主细胞中稳定共存的，这一现象称为不亲和性或者不相容性。
常见的载体结构pEMB PBR PUC pEMBL8
PBR:
PUC:
如何鉴定重组λ噬菌体：
a.蓝白筛选：清亮噬菌斑为重组子，蓝噬菌斑为非重组子。 b.SPI表型筛选原理 定义
野生型λ噬菌体在带有P2原噬菌体的溶原性E.coli的生长会受到限制的表型，称作SPI，即对P2噬菌体的干扰敏感。这种生长抑制作用是受λ噬菌体red和gam这两个基因编码的产物控制的。如果λ噬菌体缺少两个参与重组的基因red 和gam同时带有chi位点，并且宿主菌为rec+，则可以在P2溶原性E.coli中生长良好，λ噬菌体的这种表型 称作spi-，因此，通过λ噬菌体载体DNA的red或gam基因的缺失或替换，可在P2噬菌体溶原性鉴别重组和非重组λ噬菌体，能够在噬菌体P2溶原性的大肠杆菌中生长并形成噬菌斑。
λ噬菌体载体的野生型为什么不能作为基因克隆的载体？
a.λDNA基因组大而且复杂，特别是其中具有许多基因克隆常用的限制酶识别位点。
b.λ噬菌体外壳只能接纳一定长度（相当于λ基因组75%~105%）DNA分子。因此，λDNA只能作为小片段外源DNA分子（2.5kb左右）的克隆载体。这一克隆容量是显然不能满足大多数基因克隆工作的要求，必须对其进行改造。
λ噬菌体包装限制范围 70%＜λ噬菌体＜150
构建的λ噬菌体载体类型（两种）
插入型载体：一类可容纳一定长度DNA片段的噬菌体载体，在克隆时无需去除与插入大小相当的片段。容纳外源基因15kb
替换型载体：具有成对的克隆位点，在这两个位点之间的DNA区段可以被外源插入的DNA片段所取代在其中央部位有一个可以被外源插入的DNA分子取代的DNA片段的克隆载体。
MCS (Multiple cloning sites, 多克隆位点）:由许多限制酶切位点组成，往往是人工合成的一段供外源基因的插入部位的DNA序列。
cos site (cos位点):λDNA分子两端粘性末端结合形成的双链区域。
Conjugation结合：
Transformation转化：重组质粒DNA分子通过于膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞中稳定表达的过程。
Transfection转染 将重组的λ噬菌体DNA分子直接导入受体细胞内的过程。
Transduction转导 通过的λ噬菌体颗粒感染宿主细胞，将外源DNA分子导入受体细胞内并稳定遗传的过程。
什么叫柯斯质粒载体cosmid
人工构建的含有λ噬菌体的粘性末端和质粒复制子的特殊类型的质粒载体.
MB侵染宿主形成什么？浑浊型噬菌斑
什么叫噬粒：由部分质粒载体和单链噬菌体载体组成的具有双功能的新型载体系统有两个ori,一个来自质粒，一个来自单链噬菌体。
什么叫亚、伴染色体
红白筛选：（重组子筛选）：与TAC配套的宿主酵母菌的胸腺嘧合成基体带有赭石
突变ade2-1带有则个突变的酵母菌在基本培养基上形成红色菌落，当带有赭石突变的抑制基因sup4的载体存在于细胞中时，可抑制ade2-1基因的突变效应，形成白色的菌落。利用这一菌落颜色转变的现象，用于筛选载体中含有外源DNA片段插入的重组子。
常用载体克隆能力（mb)
质粒≤10kb Cosmid:35-45kb 插入型噬菌体 15kb BAC:75-300kb YAC:100-1000kb MAC:＞1Mb
五
1.分离目的基因的常用方法：a 直接分离;b 人工合成；c PCR扩增；d 从基因文库里筛选
2.基因库（gene pool)：特定生物体全基因组的集合。（天然存在）
3.基因文库（gene library or gene bank):某生物DNA片段群体与载体分子重组，重组后转化宿主细胞，转化细胞在选择培养基上生长出的单个菌落（或噬菌斑）（或成活细胞）即为一个DNA片段的克隆。全部DNA片段克隆的集合体即为该生物的基因文库。
4.cDNA文库（cDNA library):是指某生物某一发育时期所转录的mRNA经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合体。
5.基因组文库（genomic library）：是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定的DNA片段克隆到某种载体上而形成的集合。
6.基因组文库构建程序：总DNA提取 随机剪切 载体连接 转化 扩增到保存
7.cDNA文库构建程序：提取总DNA ，纯化mRNA，合成cDNA双链，去除小片段，将双链cDNA连接到载体，转化或包装，扩增及保存。
8.cDNA文库与基因组文库的区别：（版本一）a.基因组文库中的一个基因片段可以出现在不同序列中，某个基因可能会被打成不同的片段，cDNA文库不会出现这种情况。B cDNA文库不含内含子，基因组文库有内含子和不表达序列C 基因组文库在一个基因组上都是一个拷贝数，出现的概率接近。cDNA文库有一定的时效性，不同时期的DNA不同，基因的比例在基因组文库中相似，而在cDNA文库中相差较大 （版本二）A 基因组文库包含了所有的基因，而cDNA文库只包含特定时空下表达的mRNA基因，缺乏内元和调节序列，因此在研究基因结构时没有多大用处
B cDNA文库代表了mRNA的来源，其中一些特定转录很丰富，而另一些很少，所以存在