病理技术员培训

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?(1〕刚果红染色液。刚果红1g,蒸馏水100ml; ?(2〕Harris苏木素染色液。

淀粉样物质染色(介绍刚果红染色) ?2〕染色步骤:

?(1〕苏木素染色液浸染2分钟; ?(2〕0.5%盐酸乙醇分化数秒钟; ?(3〕流水洗,蒸馏水洗2次; ?(4〕刚果红染色液中25分钟; ?(5〕无水乙醇迅速脱水2次; ?(6〕二甲苯透明,中性树胶封固。

?结果:淀粉样物质呈红色,细胞核呈蓝色。

第八章 细胞学检查技术

?细胞学检查是肿瘤病理诊断和普查较常用方法。

?特点:简便、快速、无创伤,可反复多次检查。

?对于肿瘤,只做初步诊断,确诊依据活体组织学检查。 常规细胞病理学技术 一、取材、涂片制备

痰涂片、胸水、腹水及尿液制片 二、固定

三、染色 (巴氏染色)

常用固定液

(1)等量95%乙醇和乙醚混合液 (2)氯仿酒精固定液 (3)95%酒精固定液 (4)福尔马林固定液

细胞学研究,固定液选择要根据实验要求条件而定,如用细胞涂片作原位PCR,固定液要选用多聚甲醛。

巴氏染色步骤

1.标本95%酒精固定3-5分钟 2.Harris苏木素液5-10分钟

3.水(蒸馏水或自来水)漂洗2-3次 4.1%盐酸水溶液(或1%盐酸酒精液) 浸1-3次

5.自来水浸洗1-2次

6.自来水或稀碳酸锂(100ml蒸馏水中加碳酸锂饱 和液1滴),涂片返蓝为止

7.依次置入70%→80%→95%酒精, 各2分钟

8.桔黄G6液,1分钟

9.95%酒精Ⅰ、Ⅱ缸,各1分钟

10.EA36液,5分钟

11.95%酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 各1分钟 12.无水酒精Ⅰ、Ⅱ,各1分钟 13.二甲苯Ⅰ、Ⅱ,各2分钟 14.中性树胶盖片封固

涂片制备 ?注意要点:

1.涂片动作要轻柔;

2.涂片要均匀,不易太厚或太薄; 3.涂片时要避免来回摩擦损坏细胞。

?适宜的涂片是涂片的细胞占玻片的2/3,在镜下每个视野内都布满细胞,间隙很小。 涂片固定 ?1.湿固定法:

即趁标本新鲜而湿润时即投入固定液内,这种标本染色后,染色鲜艳,结构清楚。 常用于痰液涂片、阴道涂片、宫颈涂片、穿刺涂片、食管拉网术涂片等。 ?2.干燥固定法:

即等待涂片自然或吹风机吹干后在固定。 ?固定液:95%酒精

?固定时间:10--20分钟 ?染色方法:常规HE染色

第九章 大体标本制作有关知识 ?1.大体标本的收集

通过尸体解剖和活体组织(包括外科手术切除标本和活体组织穿刺标本〕检查时发现并收集。

?2.大体标本的取材: 越新鲜越好

3.大体标本的固定

?1〕固定的目的:

将受检组织尽快地侵入固定液内,使组织和细胞的固有成分迅速凝固,防治自溶和腐败,使其保持与生活状态有相似的结构,以利于切片和观察。

?2〕固定液的选择:

A.甲醛(Fomaldehyde〕,又称福尔马林,其浓度在4%,它是一种还原剂,极易挥发,散发出强烈的刺激性气体,使人流鼻涕、流眼泪,呼吸道有异物感。 B.95%酒精(乙醇〕,除具有固定组织的作用外,尚有脱水作用 3.大体标本的固定 ?固定要求:

1.固定后达到防腐的目的;

2.能长期保存组织原有的体积和特色;

3.标本自然颜色长期保存后再做组织切片也不影响染色效果

?一般用10%甲醛溶液固定,不易用有色的混合固定液。

2. 动物标本取材: ①动物致死法

麻醉法,空气栓塞法,断头法,击头法,股动脉放血法等,要求动作迅速,及时解剖,取材与固定 ②动物取材注意事项:

准备好锋利的刀剪,固定液,取材应新鲜,最好是心脏还在跳动时取材,并立即投入固定液.组织块厚度不超过3mm(应将组织上的血液,渗物,粘液粪便等用生理盐水冲洗干净,选好组织块的切面,切除不需要的部分,再固定),应尽可能维持组织原形,对神经肌肉皮肤组织,可将其两端固定在木板或硬纸板上,然后再固定.

用化学反应原理,在切片上滴加某种化学试剂,使之与组织或细胞中的生物化学物质结合,再用显色剂使之显色,达到定位、定性地显示组织或细胞中的某种物质成分,这种技术称为组织化学和细胞化学技术。其结果可用显微镜和电镜观察。结合定量病理学技术,还可对有关成分定量。

? 糖类 ? 脂类 ? 核酸 ? 酶类

? 胶原纤维 ? 弹力纤维 ? 神经纤维

? 细胞膜、核膜结构

概念:免疫组织化学技术是指利用已知的抗

体与组织中相应的抗原结合,并利用 显色剂在原位将抗原物质显示出来 原理:抗原+抗体+显色剂

特点:在组织中原位显示某种特异性抗原 常用显色剂种类:酶、金属粒子、同位素 生物素、化学显色剂(DAB) 结果观察:显微镜、透射电镜

抗 原 ← 组织中 +

抗 体 ← 试剂 ↓ 抗原抗体复合物 +

第二抗体 ← 标记有显色底物 ↓

显色反应 ← 显色剂 (DAB)

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