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实验八 主要病原菌的认识
一、 实验前要说明的几点问题
提前十分钟进入实验室，抄写板述。上课，点名入座。 二、板述内容： 1、目的要求
认识几上常见病原微生物的形态、染色特性和培养特性。 2、实验内容
1.1 观察大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、
魏氏梭菌的形态、染色特性、生化特性。
1.2 观察大肠、沙门、葡萄球菌、链球菌在普通培养基上的培养特性。 1.3 观察大肠杆菌、沙门氏菌在鉴别培养基上的培养特性。 1.4 观察大肠杆菌、链球菌在血液琼脂培养基上的溶血现象。 三、实验部分
1、链球菌
以马腺疫链球菌和兽疫链球菌为例。 （一） 马腺疫链球菌
形态特征：为革兰氏阳性链球菌，在脓汁病料标本中呈40—50个圆形，卵圆形或似三角形菌体组成的弯曲的长链，无芽胞与鞭毛。
培养特性：在血液琼脂上，培养18—24h后，形成灰白色、半透明、表面光滑的露滴状小菌落，呈β型溶血；在血清琼脂上能生成细小粘稠、湿润、透明、表面具有颗粒状构造的露滴状菌落。 (二)兽疫链球菌
形态特征：为革兰氏阳性链球菌。形态大致同其他链球菌，在脏器涂片标本中呈单个、成对或短链状（3-5个）存在。新分离菌株，特别是在鲜血或血清培养基上，能产生荚膜。
培养特性：普通培养基和鲜血琼脂培养基上培养24h后，生成针尖大小的无色小菌落，呈β型溶血。
2、大肠埃希氏菌
形态特征：革兰氏阴性短杆菌，常单独存在，偶呈短链排列，周身鞭毛，能
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运动，无芽胞，不形成荚膜。在组织和渗出液涂片染色标本上，常呈两极着色。要注意同巴氏杆菌区别。
培养特性：普通琼脂平皿上，24h后，形成圆形、微隆起、湿润、半透明无色菌落。致病菌株呈β型溶血。在远藤氏培养基上，形成带金属光泽的红色菌落。
3、沙门氏菌
仅以马流产沙门氏菌为例。亦可根据各地情况，以其他沙门氏菌为例。 形态特征：马流产沙门氏菌为革兰氏阴性两端钝圆小杆菌，多单在，有时呈2—3个菌体相连的短链，有鞭毛，无芽胞及荚膜。
培养特性：普通琼脂平皿上，形成圆形、闪光、微隆起、灰白色菌落。时间稍久，菌落变干，表面产生皱纹，边缘形成粘液堤样。
4、布氏杆菌
形态特征：革兰氏阴性球状或短杆菌，多单在，少短链，五运动性，不形成芽胞与荚膜。利用柯氏鉴别染色法，本菌被染成红色，而其他杂菌染成绿色。
培养特性：牛型和绵羊型布氏杆菌初分离需在5%—10%CO2环境中始能生长。在肝汤琼脂上，72h形成细小，湿润、闪光、圆形隆起菌落。
血清肝汤琼脂内做振荡培养，3—6天后牛布氏杆菌在距表面0.5cm处形成带状生长。
5、巴氏杆菌
以多杀性巴氏杆菌为例。
形态特征：革兰氏阴性球杆菌，菌体两端钝圆，常单在，有时成双排列。组织膜抹片用碱性美蓝或瑞氏染色，本菌呈典型的两极染色。
培养特性：血液琼脂平皿上，发育良好。24h形成淡灰色、露珠样小菌落，表面光滑闪光，边缘整齐，不溶血。
6、炭疽杆菌
形态特征：革兰氏阳性大杆菌。在组织标本中单个存在或呈短链排列，有荚膜，无芽胞，菌体呈杆状，两端相连处呈竹节状；但在人工培养物标本中，细菌呈长链排列，无荚膜，有卵圆形的中央芽胞。
培养特性：在普通琼脂上培养24h，生成灰白色、微凸、毛玻璃样不透明菌落，边缘不整，呈火焰状。扩大观察如卷发状。明胶穿刺，呈倒立杉树状。
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7、芽孢杆菌
以魏氏梭菌和破伤风梭菌为例。亦可根据各地特点以其他梭菌为例。 菌名 形态特征 培养特性 魏氏革兰氏阳性，两端钝圆大杆菌。在动8-14可使牛乳培养基“暴烈发酵 梭菌 物体内形成荚膜。中央或偏端芽胞。 破伤革兰氏阳性，两端钝圆的细长杆菌。严格厌氧菌，在葡萄糖血液琼脂风梭菌体末端有圆形或椭圆形芽胞，比菌上，发育呈互相交错长丝，有些菌菌 体宽很多，使菌形似鼓槌状。 8、猪丹毒杆菌
形态特征：革兰氏阳性，平直或微弯的细杆菌。在慢性猪丹毒心内膜疣状物上，多呈长丝状；不运动，不形成荚膜和芽胞。
培养特性：在血液琼脂上，24—48h后生成针尖大露滴样圆形小菌落，菌落无色透明，周围可形成狭窄的绿色溶血环。在普通琼脂上生长不佳。明胶穿刺不液化，呈试管刷状生长。
9、结核分枝杆菌
以结核菌和副结核菌为例。 菌名 形态特征 培养特性 落边缘不整，如小蜘蛛样。 结核革兰氏阳性细菌细长或微弯曲杆菌，营养要求严格，生长缓慢。在甘油分枝牛型比人型短而粗，禽型具多形性。琼脂上，2—6周形成干燥颗粒状、杆菌 无芽胞、荚膜，能运动，酸性染色阳乳白色不透明叠起的菌落 性（红色） 副结革兰氏阳性短杆菌，在病料或培养基初分离须加入已死结核杆菌或草核分上均成丛、成团排列。用抗酸性染色分支杆菌浸液。在丹钦或改良小川枝杆标本镜检，呈红色球杆状、短棒状的培养基上，初代经6周，始形成细菌
四、示教
1、用实验一所学油镜的使用方法观察大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、魏氏梭菌等的形态染色特性。
杆菌 小灰白色菌落 3
2、对照课本上的培养特性，仔细观察大肠杆菌、沙门氏菌在普通培养基上的培养特性及在鉴别培养基（麦康凯）上的不同特性。观察葡萄球菌、链球菌在普通培养基上的培养特性。观察炭疽杆菌及魏氏梭菌在普通琼脂平板上的培养特性。观察链球菌及大肠杆菌在血液琼脂平板上的培养特性。 五、实验中应注意的问题
1、正确掌握实验一中油镜的使用方法，以便很好的观察各个细菌的染色特性。
2、要对照书本认真观察各个细菌在各种培养基上菌落的大小、性状。并掌握之。 六、作业
1、叙述油镜观察的各种细菌形态结构及革兰氏染色特性。 2、叙述各种上述细菌在各种培养基中的培养性状。 七、实验总结
本次实验意在提高同学们对各种常见病原微生物的认识，通过对其生理特性，培养特性等的了解，建立起一种直观的认识，以方便在以后的工作和实验中观察、识别各种常见病原微生物。 八、附：
实验所需物品
一、试验材料名称 组别 数量 合计 备注 1、菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌及魏氏梭菌 2、普通琼脂培养基 3、血液平板 4、麦康凯培养基 5、灭菌平皿50套
6、标本片：大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、魏氏梭菌 7、平皿 5 2 10 放擦镜纸、酒精棉球 8、擦镜纸 9、酒精棉球
10、双壁瓶 5 1 5 盛香柏油、二甲苯 11、香柏油 1瓶
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