硝态氮测定

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土壤铵、硝态氮的测定

(1)待测滤液的制备(水:土=10:1)

称取10g待测样品准确到0.01g,置于大白瓶中,加入100ml 0.01mol/l的CaCl2溶液,以200 r/min 25℃振荡30min,取出静置5-10min后将悬液的上部清液用干滤纸(定性滤纸)过滤,得待测滤液。 (2)硝态氮—紫外分光光度法

取上述滤液5.00 ml于50 ml容量瓶,用重蒸水定容,得待测液(一般不需要稀释,浸提液过滤后直接测定即可,但是刚施完肥的土壤硝态氮含量较高,建议取2-3样品做直接上机测定一下,标线5mg/L对应读数为1.05-1.1左右,然后决定稀释倍数)。用标线0调零,测定此待测液在220nm和275nm处吸光度A220和A275。按照下式计算校正吸光度A:A= A220-2A275。

绘制硝态氮标准曲线:

分别取100mg/L硝酸盐(NO3--N)标准溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL于100mL容量瓶,若直接测定则用浸提剂(0.01mol/l的CaCl2)定容摇匀(用蒸馏水定容即可,蒸馏水与CaCl2吸光值无差异),即分别配成0、1、2、3、4、5 mg/L的标准系列溶液。用标线0调零,分别用石英比色皿在220nm和275nm处测定标曲吸光度。用公式:A= A220 -2A275求得校正吸光度,以氮浓度为纵坐标,A(A= A220-2A275)为横坐标绘制得标准曲线。

注:标准曲线要先进行配置,并且在配置前先把紫外分光光度计打开预热30min,以节约时间。标曲根据土壤中硝态氮含量配制,标线最大值做到5,R2可达0.999以上,一般做到6/7/8即可,R2仅0.99,线性相关不好,标线要重新配置,标线275nm读数一般为0。

(3)铵态氮—靛酚蓝比色法

取步骤(1)中的滤液10.00 ml(一般吸取土壤浸出液5或10ml,具体吸取量要考虑施肥时期)于50mL容量瓶中,再加入苯酚溶液5.00 ml和次氯酸钠碱性溶液5.00mL,摇匀。在20 ℃左右的室温(或烘箱)下放置1h显色后,加掩蔽剂1ml以溶解可能产生的沉淀物,然后用水定容至刻度。用标线0调零,用1cm石英(玻璃)比色皿于625nm波长处进行比色,记录下吸光度。 注:掩蔽剂应在20 ℃左右的室温下放置1h显色后加入。过早加入会使得显色反应过慢,蓝色偏弱;加入过晚则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解。 配制铵态氮标准曲线:

测定当天将100mg/L的铵态氮标准储存液稀释40倍,即为2.5mg/L的铵氮标准液。分别移取2.5mg/L铵态氮标准溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00于50mL容量瓶中,即分别配成0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L的标准系列溶液,然后加入苯酚溶液5.00 ml和次氯酸钠碱性溶液5.00mL,摇匀。在20 ℃左右的室温下(烘箱)放置1h后,加掩蔽剂1ml以溶解可能产生的沉淀物,然后用水定容至刻度。用标线0调零,用1cm比色皿于625nm波长处进行比色,记录吸光度。以铵态氮浓度为纵坐标,A625为横坐标绘制得标准曲线。

注:标线0.5mg/L对应吸光值为0.56左右,标线做到0.7mg/L线性相关依然很好,可达0.999以上。

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