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9.限制性内切核酸酶
A.可将单链DNA任意切断 B.可将双链DNA序列特异地切开
C.可将两个DNA分子连接起来 D.不受DNA甲基化影响 E.由噬菌体提取而得
10.DNA经限制性内切核酸酶切割后，断端易于首尾相接，自行成环。这是因为存在着
A.钝性末端 B.粘性末端 C.平头（端） D.5'端 E.3'端 二、填空题
1．在接合、转化、转导或转座过程中，不同 分子间发生的 称为重组，有 和 两种类型。
2．所有限制性内切酶切割DNA均产生 和 的末端。 3．目的基因又称为目的 ，有两种类型，即 和 。
4．可作为基因克隆载体的DNA分子有 、 和 。
5．基因工程的载体具有 和 能力，并具有筛选标志基因。
6．cDNA是以 为模板，由 催化合成的。 7．重组DNA转入受体细胞中的方式有 、 和 。
8．分子杂交法筛选重组体时，采用标记的 与 进行分子杂交，以鉴定目的基因。
9．真核基因表达载体不仅可表达 ，还可表达 。 10．基因工程所用的载体可分为 和 两类。 三、名词解释
1.转化(transformation) 2.转导(transduction) 四、问答题
1.简述基因工程的基本过程。
2．基因工程中，目的基因有哪些来源?
参考答案
一、选择题 1.C 2.D 3.D 4.B 5.C 6.E 7.E 8.A 9.B 10.B 二、填空题
1．DNA;共价连接;位点特异的重组;同源重组 2．5′磷酸基;3′羟基基团 3．DNA;cDNA;基因组DNA 4．质粒DNA;噬菌体DNA;病毒DNA 5．自我复制;基因表达 6．mRNA;逆转录酶 7．转化;转染;感染
8．核酸探针;目的基因 9．cDNA;真核基因组DNA 10．克隆载体;表达载体 三、名词解释
1．转化：通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，引起细胞生物类型改变的过程。 2.转导：发生在供体细胞和受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用。 四、问答题
1．答：基因工程的基本过程包括：
（1）分：指分离目的基因和基因载体
（2）切：指利用限制性内切核酸酶分别切割目的基因和基因载体。 （3）接：指利用连接酶将目的基因与载体共价连接形成DNA重组体。 （4）转：指将DNA重组体转入细胞，可通过转化、转染、感染等方式。 （5）筛：指对含有DNA重组体的宿主细胞（阳性克隆）进行筛选和鉴定，并加以扩增。
2．答：基本方法有：
（1）从染色体DNA直接分离：主要针对原核生物。
（2）化学合成法：由已知多肽的氨基酸序列，推得编码氨基酸的核苷酸序列，利用DNA合成仪合成其基因。
（3）基因组DNA：分离组织/细胞染色体DNA，利用限制性内切核酸酶将染色体切割成片段，与适当的克隆载体连接后转入受体扩增，即获得基因组DNA文库，用核酸探针将所需目的基因自基因文库中―钓取‖出来。
（4）从mRNA合成cDNA：提取mRNA，利用逆转录酶合成与其互补的
DNA(cDNA)分子，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库，然后采取适当方法从cDNA文库中筛选出目的cDNA. (5)PCR方法扩增目的基因
（王天云）
第十五章 细胞信号转导
一、 单项选择题
1. 通过胞内受体发挥作用的信息物质为 A.乙酰胆碱 B.γ-氨基丁酸 C.胰岛素 D.甲状腺素 E. 表皮生长因子
2. 绝大部分膜受体的化学性质为 A. 糖脂 B. 磷脂 C.脂蛋白 D.糖蛋白 E. 类固醇
3. 细胞内传递信息的第二信使是 A. 受体 B. 载体 C. 无机物 D. 有机物 E. 小分子物质
4. 下列哪项不是受体与配体结合的特点 A. 高度专一性 B. 高度亲和力 C. 可饱和性 D.不可逆性
E. 非共价键结合
5. 通过膜受体起调节作用的激素是 A. 性激素 B. 糖皮质激素 C.甲状腺素 D. 肾上腺素
E. 活性维生素D3
6. 下列哪项是旁分泌信息物质的特点： A. 持续时间长 B.作用距离近 C. 效率低
D.不需第二信使 E.有特定的靶细胞
7. 胞内受体的化学性质为 A. DNA结合蛋白 B.G蛋白 C. 糖蛋白 D. 脂蛋白 E. 糖脂
8. 下列哪种受体是催化型受体 A. 胰岛素受体 B. 生长激素受体 C.干扰素受体 D.甲状腺素受体
E. 活性维生素D3受体
9. IP3与相应受体结合后，可使胞浆内哪种离子浓度升高 A. K+ B.Na+ C.HCO3- D. Ca2+ E. Mg2+
10. 心钠素通过下列哪种信息传导途径发挥调节作用 A.cAMP蛋白激酶途径 B. cGMP蛋白激酶途径 C. Ca2+-CaM激酶途径
D. 受体型TPK－Ras－WAPK途径 E.JAKs一STAT途径 二、 填空题
1．许多因素可以影响细胞的受体数目和／或受体对配体的亲和力，若受体数目减少和／或对配体的结合力降低与失活，称之为 ；反之则称之为 。
2．cAMP对细胞的调节作用是通过激活 系统来实现的，该激活过程需要 二价离子 。
3．在Ca2+-磷脂依赖性蛋白激酶途径中，膜上的磷脂酰肌醇 4,5 一二磷酸可被水解产生 和 两种第二信使。
４．PKA 被 激活后，在 存在的情况下具有催化底物蛋白质某些特定的 和／或 残基磷酸化的功能。
５．G 蛋白由 、 和 三个亚基组成，以三聚体存在
并与-------结合者为非活化型，而 亚基与 结合并导致 二聚体脱落时变成活化型。
６． 酶催化 生成 cAMP ，后者再经 酶降解成 而失活。
７．Ca2+ 一磷脂依赖性蛋白激酶途径既可以单独调节细胞内的许多反应，又可与 ————途径和 系统相偶联，共同调节细胞的代谢和基因表达。
８．肾上腺素与β-受体结合后，通过 蛋白介导激活 酶，使细胞内 ——————浓度增高，继而激活 系统。
９．单跨膜α -螺旋受体主要有 和 两种类型，其中 型与配体结合后就可催化受体自身的磷酸化。
10．细胞中的酪氨酸蛋白激酶包括位于细胞膜上的 型和位于细胞浆中的 型，其中可催化自身磷酸化的是 型。 三、 名词解释
１． 细胞通讯（cell communication）： ２． 信号转导（signal transduction）： 四、 问答题
1.简述磷脂酰肌醇信号途径中蛋白激酶C的活化过程 2.简述cAMP信号途径中蛋白激酶A的活化过程
参考答案
一、单项选择题
1. D 2. D 3. E 4. D 5. D 6. B 7. A 8. A 9. D 10. B 二、填空题
1．受体下调; 受体上调 2．PKA; Mg2+ 3．DAG; IP3 4．cAMP; ATP; Thr Ser
5．α; β; γ; GDP; α; GTP; βγ 6．腺苷酸环化酶; ATP; 磷酸二脂酶; 5 '-AMP 7．cAMP—PKA; TPK
8． G; AC; cAMP; PKA 9．酪氨酸蛋白激酶受体型; 非酪氨酸蛋白激酶受体型; 酪氨酸蛋白激酶受体型 10．受体; 非受体; 受体 三、名词解释
1.细胞通讯（cell communication）：指一个细胞发出的信息通过介质传递到另一个细胞产生相应反应的过程。细胞间的通信对于多细胞生物体的发生和组织的构建，协调细胞的功能，控制细胞的生长和分裂都是必需的。 2.信号转导（signal transduction）：指耦联各种胞外刺激信号（包括各种内外源激素信号）与其相应的生理效应之间的一系列分子反应机制。或者说是将细胞外的刺激信号转变为细胞应答的过程。即有细胞膜受体接受信息经过细胞内信使传入或胞质因子直接活化进入细胞核内，导致特定基因的激活和表达的过程。 四、问答题