发布时间 : 星期二 文章实验一 培养基的制备和灭菌注意事项及思考题更新完毕开始阅读
实验一 培养基的制备和灭菌
请同学们预习实验讲义，写好预习报告,内容包括实验目的、实验原理、实验操作步骤。上课时操作可以参考，下课前交给老师。
一. 操作前准备
1.各组所需的玻璃器皿
(1) 小试管：6支（15*150mm） (2) 三角瓶：2个（250ml） (3) 培养皿：6套（ф9cm） (4) 吸管：3支（1ml） (5) 三角玻扒：2支
2.各组同学配备培养基的工具
（1） 烧杯：1套（50ml，100ml，250ml，500ml） （2） 量筒：1个（100ml） （3） 玻棒：1支 （4） 分液漏斗：1套 （5） 药匙：2把
二. 培养基的配备
各组同学先将试管和三角瓶贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。标签粘贴位置在离瓶口1/3管(瓶)身处。
操作步骤：称量→ 溶化 → 定容 → 调PH→过滤→分装→包扎
小烧杯 小烧杯 量筒 大烧杯 省略
1. 配制营养肉汤培养基150ml
将小烧杯或称量纸置天平上，用药匙取按配方称取各种成分放入200ml的烧杯中，用少量蒸馏水溶解然后定容150ml，先配成液体培养基，再按下面方法分装：
（1）取100ml装入250ml三角瓶，加入琼脂2g，浸泡于液体培养基里，用棉塞（胶塞）塞好瓶口，贴好标签，再用防潮纸和棉绳将棉塞罩住扎好。
（2）取50ml倒在250ml烧杯里，加入琼脂1g，浸泡于液体培养基里，在电炉上加热融化后，注意补充水分保持体积不变用分液漏斗分装6支小试管，每支5ml左右（约试管高度的1/4左右）， 用硅胶塞塞好试管口，贴好标签，再用防潮纸和棉绳将试管塞罩住扎成一捆。
2.配制麦芽汁培养基（方法同上）
配置好的培养基，交到侧边台，让老师登记，待灭菌。
三. 包扎
1. 培养皿：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。
2. 试管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉花要塞得松紧恰当 （过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60o角，并将右端多余的报纸打一小结。
3. 三角玻扒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在旧报纸条的近左端，与报纸约呈45o 角，并将右端多余的报纸打一小结。
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包扎好的玻璃器皿，交到侧边台，让老师登记。
四. 清理工作
1. 各组同学各自完成：
(1) 配备培养基的所有玻璃器皿必须用铁丝（或刷子）沾洗衣粉擦洗干净；洗涤后的器
皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠，清洁好的物品放回原处。 (2) 琼脂、标签纸等堵塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须倒在垃圾袋里。。 (3) 清洁整理台面，将凳子收回台底。 (4) 离开前老师检查登记，并将报告交上。 2. 值日生工作：
(1)检查整理，台面，地板檫干净，垃圾袋扎好放在门口，更换新垃圾袋。 (2)负责高压蒸汽灭菌，由4位同学看好锅，灭菌完毕要摆好斜面。 (3)为下次实验课提供必须物品。
五. 实验报告
思考题
1. 培养基应具备哪些条件?
2. 在培养基配制操作过程中应注意什么问题?为什么?
3. 培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?
4. 培养不同种类微生物能否用同一种培养基?为什么?细菌、酵母菌、霉菌通常用什么培养
基培养？
5. 高压蒸汽灭菌的关键为什么是高温而不是高压?高压蒸汽灭菌前为什么要将灭菌锅内的
冷空气排尽?灭菌完毕后什么情况下才可以开锅盖取出灭菌物品? 6. 玻璃器皿为什么在灭菌前要先行干燥?
7. 对含糖(如含葡萄糖或乳糖等)培养基进行高压蒸汽灭菌时，应采用多大压力，多长时间
灭菌为宜?
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