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高效液相色谱分析HBIW产品纯度
指导老师：李玉洁
组员：居马赞（20092073）周续源（20092098） 班级：09310901
一、 实验目的
1.理解高效液相色谱原理:
2.了解高效液相色谱站工作原理； 3.掌握HBIW的纯度分析方法。
二、 实验原理
高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是20世纪60年代末，在经典也想色谱和气象色谱的基础上发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。与经典液相色谱相比较，HPLC采用微球填料（5-10μm），使用了高压输液泵，所以传质快、柱效高（可达20000-80000塔板/米），能分离多组分复杂混合物或性质及相近的同分异构体，并可实现快速分离。高效液相色谱还可以称为高压液相色谱（high pressure liquid chromatography），高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分力度液相色谱（high resolution liquid chromatography）或现代液相色谱（modern liquid chromatography）。
HPLC法原理：一固液色谱法为例。固定相是固相吸附剂，它们是一些多孔性的极性微粒物，如硅胶、氧化铝等。它们的表面存在着分散的吸附中心，溶质分子流动相分子在吸附剂表面呈现的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种作用还存在于不同荣哲分子间，以及同一溶质分子中不同官能团之间。由于这些竞争作用，便形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡，这就是液相色谱具有选择性分离能力的基础。本实验所采用的HPLC就是液相色谱。 HPLC色谱仪简介：高效液相色谱仪分为分析型和制备型，虽然它们的性能各异，应用范围不同，但其基本组件类似。主要部件如下：储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器数据处理装置等。
HPLC法的特点：高效液相色谱采用液体流动相，流动相也影响分离过程，这对分离的控制和改善提供了额外的因素，它能分析气象色谱不能分析的高沸点有机物、高分子和热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质。在全部有机化合物中，仅有20%的样品可用气相色谱分析，其它80%的样品可用高效液相色谱分析。HPLC易于对样品定量回收，这对任何规模的植被突然别有利。在很多情况下，HPLC不仅是作为分析方法，更多的是作为一种分离手段，用以提纯和制备具有足够纯度的单一物质。
HPLC谱有多种定量分析方法，如：峰面积（高峰）百分比法；校正归一化法；外标法和内标法。
HBIW纯度分子方法：本实验采用反相液相色谱法，它是以极性物质做流动相，非极性物质作固定相的一种色谱方法。反相液相色谱分析中常用的流动相有甲醇、乙腈、四氢呋喃和水。本实验采用四氢呋喃/谁为流动相。
三、 实验步骤
实验材料：纯净水（，用前须过滤）；甲醇（分析纯，用前须过滤）；四氢呋喃（分
析纯，用前须过滤）；HBIW（自制）。
仪器设备：高效液相色谱；色谱柱：填料SinoChrom ODS-BP，不锈钢柱φ4.6mmＸ
200mm,粒径5μm；检测器：UV230+紫外-可见检测器，波长连续可调；P230型高压恒流泵：流量范围0.001mL/min-9.999mL/min，设定步长0.001 mL/min，最高工作压力40MPa（0.001 mL/min-5.000 mL/min）、20MPa（5.000 mL/min -9.999mL/min）。株箱：具有恒温装置。
实验条件：流动相为四氢呋喃/水=90/10，流速
40℃,波长254mm。
1.000mLmin，进样量10μl，柱温
具体操作步骤：
1.采用纯甲醇或者纯乙腈冲洗色谱柱（本实验采用纯甲醇）30-60min，至基线水平。 2.停止高压输液泵的运行，将纯甲醇换成流动相（本实验四氢呋喃/水）冲洗色谱柱30-60min至基线水平。
3.清洗注样针3-4次，配制待测样品溶液（本实验采用四氢呋喃溶液）。 4.注样5-10μl，触发数据采集，记录数据，分析。
5.待测样品测试完毕，采用纯甲醇冲洗色谱柱30-60min，至基线水平。
四、 思考题
1、 针对高效液相色谱法，色谱定量分析方法有哪些？各有什么优点和缺点？ 2、 本实验采用的定量分析方法是什么？ 3、 为什么笨实验采用纯甲醇冲洗色谱柱？ 4、 查阅高效液相色谱的分类以及检测器的种类？