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生物工程综合实验
溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定
实验报告集
班级 生工1411 学号 组别 7 姓名
苏州科技大学生物实验中心学生实验报告 生物工程综合实验
实验室学生守则
一、严格遵守实验室各项规章制度和管理措施，服从教师及实验技术人员
的指导。
二、严格按照实验要求，做好实验预习,实验之前5分钟进入实验室，及时、
准确地完成实验任务，实事求是地完成实验报告，杜绝弄虚作假。 三、严格执行操作规定，爱护仪器设备及工具。凡不按教师的指导擅自操
作引起仪器、设备损坏者，应予赔偿。
四、爱护实验室公共财物，节约水电、材料和试剂。未经允许不得随便挪
动非实验需用的其他仪器，不得随便拆装仪器或将仪器、工具带至室 外。
五、持实验室的严肃安静，不得大声喧哗、嘻闹，严禁在实验室内抽烟和
吃东西。
六、严防事故，确保实验室安全，发现异常情况，应及时向有关教师和管
理人员报告。
七、每次实验结束后，主动整理好仪器设备，归还所借器材，关闭电源、
水源，按指导老师的要求做好实验结束工作及室内外的清洁卫生工作， 经指导老师许可后，方可离开。
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预 习 报 告（手写，可自行续页）
名称 溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定 实验目的和要求： 实验材料： 主要仪器： 主要步骤： 教师签名： 时间：
苏州科技大学生物实验中心学生实验报告 生物工程综合实验
实验报告
溶菌酶的提取、分离纯化及其活性测定
一、 目的
对从鸡蛋清中提取并分离纯化出溶菌酶进行活性测定
二、原理
鸡蛋是溶菌酶的主要来源，等电点约为10.5~11，最适温度50℃，最适pH为6~7左右。 1、溶菌酶分离纯化原理：
（1）等电点法利用溶菌酶等电点较高，在酸性条件下除去一些杂蛋白 （2）阳离子树脂柱层析法进一步除去杂蛋白 2、溶菌酶鉴定分析
（1）考马斯亮蓝法测蛋白含量 （2）分光光度法测定酶活性
（3）使用SDS-PAGE 鉴定溶菌酶纯度
三、实验材料与方法 1、实验材料与试剂
鸡蛋清，PBS缓冲液， 40%甘油、冰醋酸、氢氧化钠，D152大孔弱酸性阳离子交换树脂、透析袋，考马斯亮蓝G250、牛血清蛋白、乙醇、磷酸，溶菌酶标准品、底物微球菌粉，蛋白质分子量Marker 、SDS、 聚乙二醇-20000等
2、实验仪器
低速离心机、高速冷冻离心机、离心管、分光光度计，玻璃层析柱，Bio-Rad垂直电泳系统，移液枪、移液管，培养皿、玻璃棒、普通漏斗、滤纸、量筒、刻度试管及试管架、冰箱、摇床、烧杯、止水夹等。
3、实验方法
1.新鲜鸡蛋清的制备与粗分离 2. 树脂柱层析分离纯化
（1）D152树脂处理 (2)湿装法装柱(3) 上柱离子交换吸附(4) 冲平(5) 洗脱 3.透析与浓缩
(1) 透析除盐 (2) 聚乙二醇浓缩 4.蛋白质含量的测定
5.溶菌酶纯度的测定（SDS凝胶电泳）