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③而F??F?混合培养液中几乎所有细菌均为F?。 ④染色体重组频率低于10?6。
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试简述当F?或Hfr菌株与F?菌株接合时，转移的遗传物质DNA的量和转移DNA的完整性有何不同。
①Hfr?F?杂交中，转移DNA的量较多，但转移的完整性差，通常只是染色体的一个片段被转移。
②F??F?杂交中，转移DNA的量较少，但转移的完整性较强，一般可转移完整的质粒DNA。
试简述Hfr细胞与F?细胞的不同点。
①F?细胞中F因子是以游离状态存在于染色体外，而Hfr细胞中F因子以整合状态存在于细菌染色体上。
②F?细胞与F－细胞杂交时，由于F因子的转移，使F－细胞几乎都成为F?细胞，但是Hfr细胞与F?细胞杂交时，F因子是在最后被转移，所以一般F?细胞仍为F?，而有某些染色体基因的重组。
试简述F因子上三个转座子的作用。
①F因子上的三个转座子分别是IS3，IS2，r?。 ②它们不具有F因子的复制，维持与转移功能。
③但它们提供与染色体DNA同源的序列，可将F因子整合到细菌染色体上。
④这些转座子还可通过复制子融合将F因子整合到染色体上。 叙述Hayes的实验证明E.coli有性别的分化。
①Hayes用菌株A：met?thr?leu?thi?与菌株B：met?thr?leu?thi?杂交。 ②他用链霉素分别处理菌株A和菌株B，只阻碍它们的分裂而不杀死它们。
③把处理过的菌株A和未处理的菌株B混合，基本培养基上有存活菌落，频率与未处理的对照相同。而处理过的菌株B与未处理的菌株A混合，基本培养基上无存活。
④以上结果证明E.coli中遗传物质交换不是双向的。菌株B是遗传物质的受体，菌株A是供体，就如高等生物中的性分化一样。
用实验证明在细菌接合过程中有供体和受体之分。
①如用链霉素（抑制蛋白质合成）处理某一菌株，并将此菌株进行接合，仍有重组子出现，则此处理的菌株为供体；反之，则为受体。
②我们对已接合的两个亲本菌株分别用链霉素处理后，发现A菌株处理后与B菌株接合，仍有重组子出现；而B菌株处理后与A菌株接合，没有重组子出现。说明，A菌株为供体，而B菌株为受体。
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（2分） （2分） （3分） （1分） （1分） （2分） （1分） （2分） （2分） （3分） （3分） （4分） （6分） 为什么将F?细菌与F?细菌混合培养后，得到的全都是F?细菌？
①当F?细菌与F?细菌混合培养时，F?与F?细菌之间可发生接合，即F因子通过性纤毛从F?细菌转移到F?细菌中，
②在转移时，F?细菌中的F因子复制，其中一个转移到F?细菌中，原来的细菌仍为F?，所以F?细菌的培养液中添加少量F?细菌共同培养一段时间后，几乎所有的细菌均可成为F?细菌。
F?细菌与F?细菌混合培养时，为什么染色体的基因重组频率很低，只有10?6？ ①F?细菌与F?细菌混合培养时，只有F因子通过性纤毛，由F?细菌转移到F?细菌。染色体的基因不能转移。所以不能在染色体基因之间发生重组。
②我们看到的染色体的基因重组是由于染色体诱动造成的，所以频率很低，只有10?6。
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一个F'（TS）lac?质粒上有一个复制系统的温度敏感突变。而某一F'（TS）lac?/lac?gal?
菌株在30?C条件下生长几代后，将菌液涂于平板并于40?C培养，得到了一些Lac?的克隆，这些克隆形成的原因是由于F' 因子整合到染色体上。 答：（ ）是 细胞在42?C时表型是否为Lac?。
答：（ ）否
一个F'(TS)lac?质粒上有一个复制系统的温度敏感突变，那么基因型为F'(TS)lac?/lac?的已知一个特殊的Hfr菌株在接合过程中正常的转移时，Pro?在最后转移。当它与F?菌株接合时，某些pro?重组子在接合的早期就被发现；当这些pro?细胞与F?细胞混合时，绝大多数转变为pro?的细胞时也带有F因子。试解释此现象。
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pro?基因已性导到F'上，即这Hfr实际上是F'pro?，所以出现了上述现象。
试述F'质粒分离的实验方法。 ①F'质粒可从Hfr菌株中分离出来。
②如果在某一个Hfr?F?杂交时，发现了某一基因应在较晚的时间从Hfr转入F?内，但在中断杂交试验时，此基因较早地从Hfr转入F?内，那么这Hfr应为F'菌株。
③具体做实验时，为了避免有少量的菌由于接合时没有被打断，晚期的标记基因仍可将继续从供体中被转入，所以要第二次接合。如果实验结果与第一次不同，那么这菌株不是F'。要重复多次证明确实不是Hfr菌株，而是F'。
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已知E.coliHfrtrp?gal?lac?菌株顺时针转移时，基因trp在gal后转移。叙述F?trp?lac?strr 与Hfrtrp?gal?lac?杂交时得到基因型为trp?gal?lac?strr 菌株的实验过程。
①可用Hfrtrp?gal?lac?与F?trp?lac?strr接合，25分钟的后中断杂交可避免trp?的转入。
②在乳糖?EMB平板上挑选lac?strr克隆，并用影印平板方法来检查这些克隆是否为Gal?表型。
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③得到的Gal?表型的菌落再进一步影印到基本培养基上，使之不能生长，而加入色氨酸即可生长的克隆，可证明其为trp－基因型。
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已知在E.coli中基因tsx（抗T6噬菌体）pur与lac基因十分接近。实验室现有的Hfrlac?
菌株，已知lac?基因转移时间较晚。如何设计一个实验将Hfrlac?中的lac?转移到F?细胞中？
①用过量的T6噬菌体铺在F?lac?受体中，幸存者为Tsxr克隆。
②用影印法来证明它们是PUR ?，那么此F?很可能是缺失突变体（从
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tsx?pur，因为双突变可能性较小）。
③用已有的Hfrlac?与选择出的F?pur?接合，从缺少嘌呤的基本培养基上选择PUR ?重组子，这是从Hfr转移的pur基因所形成的。此时很可能为LAC ?。可用乳糖?EMB平板上来检测LAC?的克隆，加伊红美蓝，不染色即为LAC ?。 精氨酸（arg）的突变型菌株，产生不同转化类型菌落数如下：
8400 2100 420 840 840 1400 840
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用一野生型菌株抽提出来的DNA片段来转化一个不能合成丙氨酸（ala）脯氨酸（pro）和
ala?pro?arg? ala?pro?arg? ala?pro?arg? ala?pro?arg? ala?pro?arg? ala?pro?arg? ala?pro?arg?
①这些基因的顺序如何？ ②这些基因间的图距是多少？
①上述转化子总数为：8400+2100+420+840+840+1400+840+=14840 其中：ala?pro?的共转化子为：8400+840+1400=10640 ala?与arg?的共转化子为：8400+2100+840=11340 pro?与arg?的共转化子为：8400+420+840=9660 ∴基因顺序为：arg.ala.pro。
②图距：pro?ala=(2100+420+840+840)?14840=30%(30cM) pro?arg=(2100+840+1400+840)?14840=37%(37cM) ala?arg=(420+840+1400+840)?14840=25%(25cM)
用P1进行普遍性转导，供体菌是pur?nad ?pdx?，受体菌是pur?nad ?pdx?。转导后选择具有
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pur?的转导子，然后在100个pur?转导子中检定其他供体菌的基因型，结果见下表。试求：①pur和nad的共转导频率是多少？②pur和pdx的共转导频率？③哪个非选择性座位最靠近pur？
④nad和pdx在pur的同一边，还是两侧？⑤根据你得出的基因顺序，试解释实验中得到的基因型的相对比例。
基因型 菌落数 1 24 50 25 100
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nad ? pdx? nad ? pdx? nad ? pdx? nad ? pdx?
合计
1?24?25% 10024?25②pur与pdx 的共转导频率??49%
100①pur与nad 共转导频率?③pdx 非选择性座位最靠近pur ④nad 与pdx在pur的同一侧
⑤实验中pur?pdx?nad ?为最小频率。如在同一侧，pur?pdx?nad ?由四交换产生，而其余的几种由双交换产生，所以菌落数要大大多于pur?pdx?nad ?。
从中断杂交试验已知基因Lac与ade紧密连锁，而且已知ade是在Lac之后进入F?受体的，试设计实验来确定基因ade与Lac之间的距离。
①用HfrLac?ade?strs?F?Lac?ade?strr混合，相互作用60分钟后，稀释并铺在含有链霉素的基本培养基平板上。长出的克隆为F?ade?strr。
②为进一步证明是Lac?还是Lac?，需将重组子菌落影印培养到乳糖?EMB平板上。Lac?为紫红色克隆，Lac?为粉红色克隆。
Lac?ade?③它们都来自于，即Lac与ade之间发生了交换。
Lac?ade?④Lac与ade之间的距离可用下列计算：
Lac?ade?Lac?ade??100%??100%
Lac?ade??Lac?ade?ade?（3分） （1分） （2分）
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如下图所示，菌株1，2，3，4的基因型为a?b?，菌株5，6，7，8的基因型为a?b?。当它们接合时如有许多重组子a?b+用M表示；如有少量重组子用L表示；如没有重组子用零表示。根据这些结果来判断此8个菌株的性别。
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