发布时间 : 星期日 文章紫外分光光度法测定核酸的含量的实验更新完毕开始阅读
班级： 同组人姓名： 学号： 成 绩 评 定 姓名： 教师 签名 课程分子生物学实名称 验 实验 2011年 月 日日 期 实验一：紫外分光光度法测定核酸的含量
核酸是核苷酸单体聚合而成的生物大分子，是生物细胞最基本和最重要的成分，根据核酸的物理和化学性质，应用一种简便、快捷、准确的方法，达到测定核酸含量的目的。
1：元素分析表明，RNA含磷量平均为9.4%，DNA含磷量平均为9.9％，由此可以推导出核酸质量约为其含磷量的11倍，因此可从测得的核酸样品的含磷量计算核酸的含量。
2：DNA、RNA分子在强酸作用下降解的糖，再与浓酸、酚或胺生成的有色化合物，其颜色深浅与核酸含量呈正比，因此通过比色法可测得核酸的含量。
3：核酸分子中的共轭π键具有紫外吸收性质，核酸溶液的吸收度与核酸的浓度呈正比，可用作定量测定。
常用紫外可见分光光度计进行测定，分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称紫外-可见分光光度法。
1. 材料和方法
1.1 材料
1.2 核酸样品DNA
1.3 方法
1.3.1 实验器材和试剂
器材：分析天平、离心机、容量瓶、紫外分光光度计、吸管 试剂：氨水、钼酸铵-高氯酸、 1.3.2 实验步骤
当待测的核酸样品中含有酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，在测定时需要加钼酸铵-过氯酸沉淀剂，沉淀除去大分子核酸，测定上清液260 nm 处光密度作为对照。
(1)取2 支离心管，每管各加入2mL 待测的核酸溶液，再向甲管内加2mL 蒸馏水，向乙管内加2mL 沉淀剂。混匀，在冰浴(或冰箱)中放置10min，3 000r/min 离心10min。将甲、乙两管清液分别稀释至光密度在0.1~1.0 之间。选用光程为1cm 的石英比色杯，在260nm 波长下测其光密度OD260nm。 1.3.3计算DNA含量（?g/m?）甲OD260nm?乙OD260nm0.02?稀释倍数
2 实验结果
计算实验结果
3 讨论
因为蛋白质含有芳香族氨基酸，故也能吸收紫外光，通常吸收峰在280nm处，在260nm处的吸收值仅为核酸的十分之一或更低，若样品中蛋白质含量较低时对核酸紫外测定影响不大，若蛋白质含量较高时，会影响核酸含量的测定，故应去除蛋白质的干扰。