发布时间 : 星期五 文章微生物检验技术考试要点（整理-中级）更新完毕开始阅读
（TI）培养基中保温通气，可保存7天，血液采集后1分钟内注入肉汤中。
镜检：脑脊液2000r/min离心20分钟，沉淀物镜检脑膜炎双球菌常在多核白细胞内或细胞外。病原鉴定：Kovac氧化酶实验10秒内呈紫色阳性反应。
快速检测：乳胶凝集试验测抗原。上清液可—20度冻存长时间。
72. 淋球奈瑟菌：G-人类是唯一天然宿主和传染源。不耐干燥，35—36℃，2.5—5%CO2生长,最适pH7.5，对糖类生化最低只能发酵葡萄糖，主要有菌毛蛋白，脂多糖，外膜蛋白抗原。细菌培养是目前世卫推荐的唯一方法，用培养法查女病人宫颈口表面分泌物。培养基中应含万古霉素、多粘菌素B。标本接种在巧克力血琼脂平板或T-M培养基。急性期淋病菌常在白细胞内，慢性期淋病菌常在白细胞外，在中性粒细胞内有G-性双球菌具有诊断价值。
73.梅毒病原：菌体形似弹簧，运动活泼，两端尖直，有细胞壁和膜，原生质圆柱体且有3-4根周浆鞭毛，G-抵抗力极弱，对青霉素、四环素、红霉素、砷剂敏感。
标本：Ⅰ期梅毒取下疳渗出液（20分钟内查）；Ⅱ梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽出液；先天性梅毒取脐血；神经梅毒取脑脊液。
镜检：新鲜标本加盖片暗视野显微镜下检查，浆液不能含有红细胞、微生物、组织碎片。荧光标记、ELISA普光下查，镀银染色螺旋体染成棕褐色光镜下查。
病原分离：人工培养基上不易生长，接种兔睾丸或眼前房内繁殖，并能保持毒力。34-35℃，分裂为30-33小时。
抗体检测：产生特异性抗体、反应素抗体（表面脂质引起），有非密螺和密螺抗原试验。初筛试验和疗效观察---非密螺抗原试验，正常牛心肌心脂质为抗原测患者血清中反应素，判断是否复发及再感染。最常用VDRE、RPR试验。VDRE以胆固醇为载体。玻片凝集可定性和半定量，低倍观察。RPR用未处理活性炭颗粒吸附VDRE抗原。专用纸片圈内（18mm）可定性和半定量。
密螺抗原试验（证实试验）---FTA-ABS作为诊断梅毒“金标准”试验。它是间接荧光抗体检测方法， 75. 肠产毒型（ETEC）：作用小肠，霍乱样肠毒腹泻，是5岁以下婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌；肠毒素有耐热和不耐热，LT-Ⅰ是引起人类主要的致病物质，对热不稳定，65℃30分钟被破坏，A亚单位是毒素的活动部位。耐热肠毒素（ST）是通过激活肠黏膜细胞上的鸟甘环化酶，使胞内CGMP量增多而导致腹泻。
肠致病型（EPEC）：作用小肠，水样腹泻，是婴儿腹泻主要病原菌。
肠侵袭性型（EIEC）：作用大肠，志贺样腹泻，很像菌痢，发热腹痛脓血便及里急后重。 肠出血型（EHEC）：其中O157：H7可引起出血性腹泻和溶血性尿毒症，是4岁以下儿童急性肾功能衰的主要病原，6、7、8三月最高，北美多见。毒力因子：志贺样毒素、溶血素、LEE毒力岛、Vero毒素。
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肠集聚型（EAggEC）：婴儿和旅游者腹泻持续性水样腹泻。
76. 志贺氏菌分：痢疾（A群），福氏（B群），鲍氏（C群）（半透明、光滑型菌落），宋内（D群）（扁平粗糙型菌落）四群，我国以福氏和宋内常见，无荚无芽无鞭，KIA：K/A，产气＋/－，H2S－，MIU－＋/――，最后可用诊断血清作群型鉴定 群 血清型 葡萄糖 1-10 1-6 1-18 1 + + + + 乳糖 - - - - 甘露醇 - + + + 鸟氨酸脱羧酶 - - - + 只有一个血清型，Ⅰ相和Ⅱ相 痢疾志贺菌 A 福氏 鲍氏 宋内 B C D 加热60℃10分钟杀死，有强烈的内毒素，作用于肠黏膜，使其通透性增高。粪-口传播，只局限于肠道，一般不进侵入血，发热、腹痛、水样腹泻，后转为脓血黏液便，伴有里急后重、下腹部疼痛。急性中毒性痢疾多见小儿。粪便不能即时送检，需保存在30%甘油缓冲盐水中。志贺菌表达黏附、穿透上皮细胞、胞内繁殖、及扩散等活性的基因存在于大质粒上。
测志贺菌的侵袭力用Sereny试验，接种于豚鼠眼结膜囊内。
快速诊断：1、免疫染色法2、免疫荧光菌法3、协同凝集试验4、胶乳凝集试验5、分子生物学方法
77. 伤寒与副伤寒菌：无芽无荚有鞭毛（除鸡沙门）多数有菌毛，H2S可阳性，伤寒菌产酸不产气，菌体抗原有58种，鞭毛抗原有两相即特异性和共同，表面抗原有Vi，M，5三种，变异有：S-R，H-O，v-w，相位。
伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌。所致疾病4类型：
（1）、肠热症：第一次菌血症，发热、不适、全身痛，与菌的感染剂量有关，通常潜伏期为2周，第二次菌血症，高热7-10天，缓脉、肝脾肿大，皮肤出现玫瑰疹，外周白细胞明显下降，严重者有出血或肠穿孔等并发症。
（2）、胃肠炎（食物中毒）：由摄入大量＞108被鼠伤寒沙门菌(常引起食物中毒)、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌污染的食物引起。致病机制：细菌释放的内毒素。发热、恶寒、呕吐、腹痛、水样腹泻。
（3）、败血症：4、无症状带菌者：
标本：第1-2周采血，接种于室温＞20℃平衡血培养瓶，不能超过2小时送样，不能即时送样放在室温，切勿放冰箱；第3-4周取粪便；第3周起还可取尿液；整病程均可取骨髓液。
病原分离：血液和骨髓须按1：10加入血液需氧培养瓶或胆盐葡萄糖肉汤增菌后接种于血琼脂平板或营养琼脂平板，SS—双糖或三糖铁（TSI）培养基。粪便接种麦康凯（MaC）/DHL、SS平板上，或SF增菌。
病原鉴定：凡符合克氏双糖铁（KIA）斜面或三糖铁（TSI）：不发酵乳糖、蔗糖，发酵葡萄糖、麦芽糖甘露醇，产气＋/－，H2S＋，吲哚尿素V-P均－，硝酸盐还原阳性，多价血清阳性的为沙门属。尿
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素酶试验与变形杆菌区别。胞内寄生菌，临床上主要为不明原因持续发热。尿素半固体（MIU）。A-F群沙门菌（O）多价血清作玻片凝集，阳性则选用O2、 O4、 O7、 O9因子定群。
血清学诊断：肥达试验，一般伤寒沙门菌O凝集效价＞1：80、H＞1：160，副伤寒H＞1：160具有诊断意义。新一代疫苗：伤寒Vi荚膜多糖疫苗。
78. 变形杆菌属：普通，奇异，产黏。普罗威登斯属有：产碱，斯氏，雷极，摩根菌只有摩氏摩根菌。有明显多形性，呈球状或丝状，生长于10～43℃，在固体培养基上普通和奇异呈迁徙生长现象，三属氧化酶阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性G-杆菌，加入1%石炭酸或苯乙醇使终浓度为1g/L和0.25%可抑制变形菌迁徒样生长。能迅速分解尿素以区别沙门菌，外斐试验辅助诊断立克次体
79. 耶尔森氏菌（鼠疫）：有7种，鼠疫，假结核，小肠与致病有关。带有3种质粒，主要的致病决定基因由质粒和染色体上的毒力岛编码。
鼠疫耶尔森：有荚无芽无鞭，两极浓染，28～30℃，pH6.9～7.1，液体中培养好，底部可有钟乳石样，常用1%溶血的胰酶消化肉琼脂（赫氏琼脂）加入亚硫酸钠或脱纤维血有刺激生长，用腐败材料分离，培养基中加入甲紫、胆酸钠抑制杂菌，龙胆紫亚硫酸钠为其选择性培养基，3%氯化钠上生长呈多形性。
小肠耶尔森：无动无芽无荚G－，25℃有动力，有周鞭毛，最适温20～28℃，VP试验25℃阳性，37℃阴性，KIA只利用葡萄糖，MIU22℃动力阳性37℃阴性。假结核：25℃有周鞭毛有动力37℃无动力，最适温30℃，pH6～8。血清检测的抗体是F1
经典鼠疫“四步检验”：显微镜检查（美兰染色）、培养、鼠疫噬菌体裂解试验（早期为暗黄的灰色表面粗糙的颗粒样突起，在血培养上有花边状薄而透明不整齐的边缘菌落。48小时为灰白色中央突起菌落，）、动物实验（小鼠、豚鼠）。
快速检测；PCR（高度特异性基因：fra、pla、inu、hms）、免疫检测（F1抗原）
所有疑似鼠疫病人都需采取血标本，疑似腺鼠疫病人取肿大淋巴结穿剌液；肺鼠疫病人取咳痰、咽拭子标本。
80. 枸橼酸杆菌：有弗劳地，异型，无丙二酸盐。只有弗劳地靛基质－，H2S＋，仅异型的丙二酸盐＋，β-半乳糖苷酶，赖氨酸脱羧酶，枸橼酸利用三试验：枸橼酸菌＋－＋，沙门－/＋＋＋，爱德华－＋－。
81.胶体金标记技术应用领域：免疫层析技术。其优点---标记物非常稳定。
82.细菌明胶液化试验原理---某些细菌产生胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸而液化。 氧化酶试验--用于肠杆菌科与假单胞菌的鉴别。胆汁溶菌试验--用于肺炎链球菌与甲型链球菌鉴别 ONPG试验—迟缓分解乳糖的细菌试验为阳性。
83. 沙雷菌：最适温10～36℃，4%氯化钠下可长，产生灵红霉素（非水溶）和吡羧酸（水溶），关
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键生化是DNA＋和葡萄糖酸盐＋。
85. 霍乱菌：呈弧状或逗点状，米泔样粪便作悬滴观察，细菌呈穿梭样或流星状运动；粪便涂片镜检见排列如“鱼群”状G－菌，耐碱不耐酸，可繁殖pH6.0-9.2。最适宜生长pH7.2-7.4。血清分型可分为AB的小川型，AC的稻叶型，ABC的彦岛型
病原分离：水样便直接接种在硫代硫酸盐－柠檬酸盐－胆盐－蔗糖平板（TCBS）上37℃形成较大黄菌落，在含亚碲酸钾或庆大霉素平板选择性平板上呈灰褐色。食品及水样常用碱性蛋白胨水增菌培养后再接种，钠离子可剌激生长，但在＞8%NaACI中不生长。常用的保存或运送及增菌用碱性蛋白胨水，文-腊二氏，卡-布。
病原鉴定： O1群无芽胞，无荚膜，单一鞭毛 ；O139群菌体周围有一层比较薄的荚膜。测定耐热的特异性O抗原，用玻片凝集或ELISA鉴定， 血清效价1：40-1：50。不耐热的非特异性H抗原，有两个环状染色体，即染色体1、染色体2。
深入鉴定：流行株与非流行株依靠噬菌体---生物分型法。噬菌体（VP1-VP5）将埃尔托型霍乱弧菌分成32个噬菌体型。根据溶原性、溶原噬菌体的敏感性、山梨醇发酵试验、溶血试验，将埃尔托型霍乱弧菌分成a-l共12个生物型。常见的流行株为噬菌体1-3型，生物型a-d型，常见的有：la、lb、ld。产毒基因鉴定：用PCR检测ct基因，流行株常带有霍乱肠毒素。
免疫检测：霍乱为肠为非侵袭性细菌，主要剌激局部黏膜产生分泌性AgA抗体，同时大量毒素及细菌脂多糖体的产生使机体产生抗毒和抗菌抗体。
恢复期带菌者是指临床症状消失后3个月内带菌者，恢复期带菌的时间一般不超过 2 周，健康带菌者的排菌时间一般不超过7天。
86. 副溶血弧菌：嗜盐性弧菌（与霍乱显著区别），是我国沿海地区最常见的食物中毒病原菌，两极浓染，NaCl最适35g/L，无盐不长，pH7.0～9.5，最适pH 7.7，不耐热，不耐酸，在TCBS上不发酵蔗糖菌落绿色，＞80g/L盐内不长，神奈川现象（β溶血），KP是致病株能使人或兔红细胞发生溶血对马红细胞不溶血为阳性。
87. 气单胞菌最适生长温度30℃，但在0～45℃皆可生长。
88. 弯曲菌属是一类微需氧菌，不分解糖，氧化酶+，菌体弯曲逞豆点状，S状或螺旋状有动力G－菌，5种5亚种，对人致病的主要是空肠弯曲菌（人类腹泻最常见之一，43℃生长，25℃不生长）
89. 幽门螺杆菌（HP）：常用布氏培养基或脑心浸液血琼脂加入5～10%羊血和马血，在（85%N、10%CO2、5%O2）条件下，37℃3—7天，长成针尖状的半透明菌落，加入万古霉素、TMP、两性霉素B等组成抑菌剂防止杂菌生长。与十二脂肠溃疡、胃癌、胃淋巴瘤发病有关。传染源主要是人，粪-口途径。标本：胃黏膜活检组织；
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