发布时间 : 星期六 文章微生物检验技术考试要点（整理-中级）更新完毕开始阅读
基。PH5-9稳定；射线和紫外线、X线、r线能灭活病毒。病毒学上常用的细胞类型：原代细胞、二倍体细胞、传代细胞。
27. 超净工作台应采用层流技术净化空气、选择垂直气流通风方式。洁净度可达百级，只保护
样品。
28.菌体蛋白电离后带负电荷；而碱性染料电离时染料离子带正电。
29.染色程序及方法：制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检。 革兰染色法：初染（草酸铵结晶紫）、媒染（碘液）、脱色（95%酒精）、复染（番红）。 抗酸染色法：5%石炭酸复红、5%盐酸酒精脱色、美兰复染。
芽胞染色：菌悬液→孔雀绿→水浴15-20分钟→涂片→干燥→固定→水洗脱色→番红或稀释石炭酸复红复染→水洗→晾干
荚膜染色：（负染色法、墨水法）。负染色法：制片（蒸馏水+菌）→干燥（晾干）→染色（复红）→水洗→干燥（晾干）→涂墨素。背景灰色、菌体红色、荚膜无色透明
鞭毛染色---镀银法；媒染A液—10%单宁酸10ml+5ml饱和硫酸钾铝水溶液+1ml苯胺饱和水溶液+5%氯化铁水溶液成墨色。银染B液—5%硝酸银+浓氨水（比重0.88）成薄雾状。
制片（蒸馏水+菌）→干燥（晾干）→染色（A液3—5分钟）→水洗→干燥（晾干）→染色（B液稍加热分30—60秒）→水洗→干燥（晾干）。菌体深褐色、鞭毛褐色。
30.病毒吸附蛋白（VAP）；血凝素（HAs）。病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成及组装、成熟和释放
31.病毒突变株分：条件致死性突变株，空斑和宿主依赖性。遗传型变异机制有突变，基因转移，重组。突变：突变率由复制的准确度，DNA发生损伤的机会，及对损伤DNA修复程度来决定。
32.非特异性免疫：干扰素（IFN）、NK细胞 。干扰素（IFN）--具有广谱抗病毒作用，只能抑制病毒，即通过诱导细胞合成抗病毒蛋白（AVP）发挥效应。
33.小淋巴细胞分为：T细胞、B细胞、K细胞。T细胞来自骨髓，在胸腺成熟。在人体血液中T细胞占淋巴细胞总数的60—70%，；在胸导管则占95%以上。B细胞第一个合成产物是u链。
34.碱基的置换：嘌呤换嘌呤，嘧啶换嘧啶为转换，嘌呤换嘧啶为颠换。影响基因表达的因素有：调控部位，调节蛋白，效应分子。
35.转化：受体菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段，整合重组（与染色体重组）使受体菌的性状发生变异。一般有链，嗜血，芽胞菌有此功能。
36. G＋菌等电点pI=2～3，G－菌等电点pI=4～5。RNA主要存在于细胞质中占细菌干重的10%，DNA存在于染色体和质粒中。G+菌的感受态是由感受态因子（CF）的胞外信号诱导的。
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37. 转导：以噬菌体为媒介，将供体菌的基因转移到爱体菌内而致受体菌基因改变，分普遍和局限。 38. 接合：受体菌和供体菌直接接触，供体菌通过性菌毛所带的F质粒或类似遗传物质转移到受体菌。 39. 溶源性转换：是噬菌体的DNA与细菌染色体重组，使宿主遗传结构发生变异。
40. 原生质融合：两种经过处理失去细胞壁的原生体混合和可发生融合后的双倍体可发生染色体间的重组。
41. 基因重组可使基因再激活表现为：交叉复活和多重复活。
42. 粘附素是细菌表面的蛋白质有菌毛和非菌毛。进入宿主：黏附，定植，侵入，转归。毒力有侵袭力和毒素。
43.侵袭力：菌体表面结构，菌毛，侵袭性酶（凝固酶，透明质酸酶，链激酶，胶原酶等）。是指病原突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力。
45.细菌种的科学命名采用拉丁文种属双命名法，前一字为属名，名词，后一为种名，形容词。目前国际上普遍采用伯杰分类系统，也有用CDC（USA）。目前以细菌细胞壁的结构特点作最高一级分类依据将原核界分为薄，坚，软，疵壁四门。科，属，种分类主要依靠生化特性和抗原结构。
46. 显微镜的分辩率为波长一半。荧光显微镜的光源为超高压汞灯（50—200W）。
47.油浸物镜的工作距离一般是0.2mm。普通光学显微镜不能观察细胞和细菌的亚结构。相差显微镜特殊装置—--环状光阑、相板，利用光干涉现象。适用于对活体细胞生活状态下的生长、运动、增殖情况、及细微结构的观察。用绿色滤光片。
48. 不能立刻接种的血应用SPS（氯化钠溶液）抗凝。怀疑细菌性心内膜炎时血培养不少于三次。 49. 肠杆菌科的强选择（SS琼脂）弱选择（EMB，麦康凯）。
50. 直接镜检2h报告，最后鉴定和药敏一般不过3天，除血外，必须在24h内预报 53. α溶血是草绿色，β溶血是透明环，γ溶血红细胞不溶解，双环。 54. 细菌数量达106~107CFU/ml时培养肉汤才见混浊。
55. 血培养中有105菌落形成单位（CFU）/ML时才能通过革兰氏染色检出细菌。 56. AMS系统是目前微生物鉴定中最常用的自动化仪器。
57. 突变种纯系动物：实验动物正常染色体中某个基因发生了变异的具有各种遗传缺陷的突变品系动物。
58. 纯***动物：无计划随意交配的动物。近交系动物：采用兄妹交配（或亲子交配）繁殖20代以上的纯品系动物。无菌动物：体表肠道内无菌、体内无抗体。悉生动物：给出无菌动物引入已知的5～ 17种正常肠道菌的动物。
59. 小白鼠对肺链，破伤外毒素敏感，豚鼠对结核白喉易感，猫对金葡萄菌肠毒敏感。测定病原体
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的感染性最好选用无菌动物或悉生动物。
60. 菌种保存：“冻干”保存—稳定剂（脱脂乳、蔗糖）。冻干菌种只能使用一次，冻干菌种打开后需要以传代保存形式保留工作菌种。冻干菌种在使用时须“复苏”且须传代才能恢复原生长特性。低温保存：-20℃或-80℃+甘油作稳定剂。菌种取出须置于干冰或预冷的铅质容器内，用完立即放回不可菌种解冻。冷冻干燥保存法是最有效的方法，利用各种斜面和半固体加石蜡油是最常用和最简便的方法，一般不含糖，不用液体。
61. 在细菌生长到足够量时加入抑制蛋白质合成的抗生素，在细菌停止繁殖后质粒还在复制，可以提高质粒的收获量。
62. 粪便呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂，触酶阳性，凝固酶阳性玻片法筛选，试管法确证。必须做苯唑西林的敏感试验。
63. 真菌，霍乱，铜绿及粪碱需在室温保存，而脑膜炎，淋球，初次分离的流感嗜血菌保存于37℃。每转种三代要鉴定一次。
65. 葡萄球菌：产生脂溶性色素，多数分解甘露醇产酸液化明胶和产生血浆凝固酶。蛋白抗原（A蛋白）种属特异无型特异，多糖抗原（A，B，C）是半抗原，有型特异。是抵抗力最强的无芽胞菌。
66. 布鲁司菌：无鞭无芽G-呈散沙状，S型有荚膜，专性需氧，抵抗力强，37 ℃，PH6.6～6.8，血液、血清、肝浸液可促进生长，48小时形成微小，无色透明光滑凸起菌落。6个种19个生物型，对人致病是羊、牛、猪种。血清凝集试验（SAT）是常用诊断实验，虎红平板凝集试验（RBPT），补体结合试验（CFT）、免疫荧光试验（IFT）等。静脉血3—5毫升。用肝浸液琼脂培养基、蛋白胨、土豆浸液琼脂等。动物分离—豚鼠。生化特征：分解尿素、产生硫化氢。
诊断标准：血清试管凝集试验（SAT）1：100++以上，补体结合试验（CFT）：1；10++
67. 莱姆病原：伯道疏螺旋体引起莱姆病，细胞结构：原生质柱、表层、外膜、鞭毛。微嗜氧G-，能自身合成类脂化合物、主要脂肪酸，并将嘌呤碱结合到核酸中，但不能合成长链脂肪酸，发展酵代谢产物---乳酸。蜱传播媒介，鼠主要宿主动物，标本在 -20—4℃运送。
标本制成悬液，暗视野显微镜20×10或40×10下检查。
病原分离：接种BSK培养基33℃培养。用兔抗B31特异性多克隆抗体进行间接免疫荧光抗体试验（IFA），或ELISA、WB---最终确诊方法。
68. 钩端螺旋体：原核细胞型微生物，双股DNA。需氧或微需氧，是致病性螺旋体中唯一能人工培养的。其中鼠类和猪为主要的传染源和储存宿主，通过人的皮肤黏膜侵入。常用柯夫培养基或EMJH培养基，需加入10%兔血清或牛血清，培养液透明有轻度乳光，摇动时有云雾状混浊。G-Fontana镀银染色成棕色。对酸碱敏感，最适是PH7.2～7.5，低于6.8，高于7.7生长不良，最适温28～30℃，12h分
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裂一次。电镜下基要本结构：柱形原生质体、内鞭毛、外膜
标本：血液、脑脊液在发病后10天内，出现发热但未用药前，不能即时送检，血液用不含枸橼酸钠抗凝5-20℃保存，1周内接种。2周取尿液则用1%牛血清白蛋白保存，用磷酸盐缓冲液稀释取50微升接种到5毫升培养基中每个稀释度2管，每管中先加入30微克新霉素滤纸片或每毫升培养基加5-氟尿嘧啶200-400微克。暗视野显微镜检查每周1次连5周，阴则每月2次连4月。
病原鉴定：血清群用显微凝集试验（MAT），血清型用交叉凝集吸收试验，分子生物学技术。 69. 致病性链球菌：沉淀生长（肺链为混浊），在含腹水的培养物上生长良好，溶血株呈絮状或颗粒状生长，不溶血株呈均匀混浊生长。
（一）化脓性链球菌：标本1天内送，不超过2天。THB增菌肉汤、5%脱纤维羊血的胰酶消化大豆琼脂培养基，血液和脑脊液应先增菌后接种平板，脓液、咽拭子直接种于血平板。
A群链对杆菌肽敏感青霉素G为首选，抑环＞10cm敏感。(90%对人致病) B群链CAMP试验阳性（鉴定指标35℃卵育），马尿酸钠水解试验阳性 D群链七叶甘水解试验变黑色为阳性，6.5%氯化钠生长试验(黄色)
快速检测:酶标免疫测定法、PCR（A群链致热外毒素A，B，C基团speA，speB，speC各溶血素O基团slo）。抗溶血素O抗体---溶血法、胶乳凝集法。
（二）肺炎链球菌：37.5℃pH 7.4—7.6初次CO2卵育, 在含3%～5%的兔血清中生长良，血平板上草绿色a溶血环。如G+具有矛头状双球菌可初步诊断。培养时间过长会自溶管底澄清，以奥普托欣试验、分解菊糖，胆汁溶菌阳性区别于甲型溶血性链球菌。主要抗原有：蛋白质抗原、多糖抗原、核蛋白抗原。胆汁溶菌试验---0.5ml生理盐水细胞悬液制成相当于0.5麦氏单位的密度标准。
取细胞悬液0.25ml+0.25ml 2%的脱氧胆酸35--37℃培养2小时，管液清澈或浊度消失为阳性。 氨基糖苷类合用，β溶链致病性最强，α溶链为条件致病菌。几乎所有的肺链对Optochin敏感。
（三）猪链球菌：人感染致病：脑膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克。35个血清型。2型致病其属于R群，属特异基团tuf、种特异基团16SrRNA
70. 肠球菌属：能在高盐（6.5% NaCl）高碱（pH 9.6）40%胆汁培养基上和10～45℃生长，是G+菌中仅次于葡萄球菌的重要院内感染病菌。临床上分离最高的是粪肠球菌，可分庆霉素高耐药和低耐药，一般用β-内酰胺类和氨基糖苷类联合。
71. 脑膜炎奈瑟菌：脑液中位于中性细胞内，大多能分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气，具有氧化酶和触酶。能产生自溶菌不宜冰箱应立即保温送检，冬末春初为流行高峰，青霉素G为首选。依据荚膜分13个血清型，主要是ABC三个血清型及W135、Y。通常采3管脑脊液（化学、微生物、细胞学）含添加剂的巧克力平板（CAP）和血琼脂平板（BAP），如不能立即接种，，则接种至预热35℃的转运—分离
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