发布时间 : 星期六 文章Bio-Rad色谱柱说明书(DOC) - 图文更新完毕开始阅读
当时用有机调节剂时，使用5％溶液以0.1ml/min的流速操作直到基线平稳。，然后提高有机调节剂浓度至理想值。观测每一根柱子的最大值。第一步使用5％的溶液降低柱内物质的瞬间搅拌和可能的超压。
避免柱压突然骤变。填料可以被压缩，这可能导致托尾和拄效下降。 5.4 柱测试
所有的新柱子应该在使用之前进行测试，以确定其性能正常。使用时间长了以后，柱性能可能会变化。需要进行重新测试。为得到可靠的分析，效率（理论板数）和选择性（分离度）需能达到需要的最小值。
HPLC系统的性能应该和独立于色谱柱进行验证。因为每根柱子只是在运输前进行检查，而不能反映提供的色谱硬件或流动相的问题。应确保柱子额外体积最小。效率降低经常由于管子会注射器问题引起。如果分离峰与提供的色谱图显著不同，应该仔细检查每种物质，重新配置流动相。
如果洗脱峰顺序和峰形与测试色谱图类似，但是物质并没有完全溶解，应该调整流动相和其他的色谱法变量可能会得到最优的分离或者改善溶解性。当所有物质都充分溶解时，样品分析是最优的。
Bio-Rad色谱柱通过对以下参数的优化，可以实现其特定的应用：离子树脂的形式和柱结构。下面的表格给出了不同树脂基分析柱的对比，且提供了操作准则。表1提供了柱技术说明和操作条件。表2则提供了一些树脂改良时需要的一些数据，这些数据用于柱的清洗、再生和保存。
表1 柱技术说明和操作条件
胺基HPX－87C柱， 300×7.8mm 货号 树脂离子型式 担体 125－0095 钙 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 粒子尺寸 最大压力 最高温度的允许流速 最高温度 典型流动相 PH范围 保护卡头 9μm 1500磅/英寸2 1.0ml/min 85℃ H2O 5－9 125－0128 胺基HPX－42C柱， 300×7.8mm 125－0096 钙 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 25μm 800磅/英寸2 0.7ml/min 85℃ H2O 5－9 125－0128 胺基HPX－87P柱， 300×7.8mm 125-0098 铅 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 9μm 1500磅/英寸2 1.0ml/min 85℃ H2O 5－9 125－-0119 快速糖分析柱， 300×7.8mm 125-0105 铅 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 9μm 1500磅/英寸2 85℃ H2O 5－9 125－0119 胺基HPX－42A柱， 300×7.8mm 125-0097 银 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 25μm 800磅/英寸2 85℃ H2O 6－8 125－0118 胺基HPX－87H柱， 300×7.8mm 125-0140 氢 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 9μm 1500磅/英寸2 65℃ 0.005MH2SO4 1－3 125－0129 快速酸分析柱， 100×7.8mm 125-0100 氢 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 9μm 1500磅/英寸2 65℃ 0.005MH2SO4 1－3 125－0129
发酵检测柱， 150×7.8mm 货号 树脂离子型式 担体 125－0115 氢 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 粒子尺寸 9μm 胺基HPX－72－O柱， 300×7.8mm 125－0141 氢氧根 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 11μm 胺基HPX－72S柱， 300×7.8mm 125－0146 硫酸盐 季胺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚11μm 胺基HPX－87N柱， 300×7.8mm 125－0143 钠 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 9μm 胺基HPX－87K柱， 300×7.8mm 125－0142 钾 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 9μm 胺基HPX－87C柱， 250×4mm 125－0094 钙 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 9μm 胺基草甘膦分析柱，100×4.6 250×4.6mm 300×4.6mm 125－0108，125－0106，125－0104 钾 磺化丁二烯—苯—苯乙烯共聚物 9μm 最大压力 最高温度的允许流速 最高温度 典型流动相 PH范围 保护卡头 1500磅/英寸2 1.0ml/min 65℃ H2O 1－3 125－0129 1200磅/英寸2 1.0ml/min 35℃ H2O 9－14 125－0133 1200磅/英寸2 1.0ml/min 65℃ H2O 4－9 125－0132 1500磅/英寸2 1.0ml/min 85℃ H2O 5－9 125－0508 1500磅/英寸2 1.0ml/min 85℃ H2O 5－9 125－0507 1500磅/英寸2 1.0ml/min 85℃ H2O 5－9 125－0128 1500磅/英寸2 1.0ml/min 50℃ 0.005M KH2PO4+4%MeOH PH 2.0 None requied
表2 清洗、再生和贮存指南
胺基HPX－87C胺基HPX－42C柱， 300×7.8mm CH3CN 30%；EtOH，IPA 5% 钙盐 甲醇、酸、碱，其它盐 30%乙氰水溶液 胺基HPX－87P柱， 快速糖分析柱， 300胺基HPX－42A胺基HPX－87H柱， 300×7.8mm CH3CN 40%；EtOH，IPA 5% 磷酸、硝酸（<5%）、盐酸 甲醇,盐,碱,金属离子,胺,其它有机溶剂,H2O>PH 3 (1)5%乙氰的0.005M硫酸,(2) 30%乙氰的0.005M硫酸 0.2 ml/min 65℃ (1)4hr; (2)12hr; (3)冲流动相直到基线稳定 0.025 M硫酸 0.2 ml/min 65℃ 4－16 h 0.005 M硫酸 快速酸分析柱， 100×7.8mm CH3CN 40%；EtOH，IPA 5% 磷酸、硝酸（<5%）、盐酸 甲醇,盐,碱,金属离子,胺,其它有机溶剂,H2O>PH 3 (1)5%乙氰的0.005M硫酸,(2) 30%乙氰的0.005M硫酸 0.2 ml/min 65℃ (1)4hr; (2)12hr; (3)冲流动相直到基线稳定 0.025 M硫酸 0.2 ml/min 65℃ 4－16 h 0.005 M硫酸 柱， 300×7.8mm CH3CN 30%；有机改性剂（最大） EtOH，IPA 5% 无机改性剂 避免 硫酸钙或硝酸钙 甲醇、酸、碱，其它盐 清洗溶剂 30%乙氰水溶液 300×7.8mm ×7.8mm 柱， 300×7.8mm CH3CN 30%；EtOH，CH3CN 30%；EtOH，CH3CN 30%；IPA 5% IPA 5% EtOH，IPA 5% 硝酸铅 甲醇、酸、其它盐、PPb级的铅盐不溶的其它阴离子 30%乙氰水溶液 硝酸铅 甲醇、酸、碱，其它盐 30%乙氰水溶液 无 甲醇、酸、碱，所有盐类 30%乙氰水溶液 流速 温度 时间 再生溶剂 流速 温度 时间 贮运溶剂 0.2 ml/min 25℃ 4 h 0.1M Ca(NO3)2 0.2 ml/min 85℃ 4－16 h 水 0.2 ml/min 25℃ 4 h 0.1M Ca(NO3)2 0.2 ml/min 85℃ 4－16 h 水 0.2 ml/min 25℃ 4 h 30%乙腈 *0.1MPb(NO3)2,PH4.0 0.2 ml/min 60℃ 16 h 水 0.2 ml/min 25℃ 4 h 30%乙腈 *0.1MPb(NO3)2,PH4.0 0.2 ml/min 60℃ 16 h 水 0.2 ml/min 25℃ 4 h 没有要求 － － － 水 *：用0.1M HNO3调Pb(NO3)2的PH到4.0
发酵检测柱， 150×7.8mm CH3CN 40%；EtOH，IPA 5% 磷酸，硝酸(<5%) 甲醇,盐,碱,金属离子,胺,其它有机溶剂,H2O>PH 3 (1)5%乙氰的0.005M硫酸, (2) 30%乙氰的0.005M硫酸 0.2 ml/min 65℃ (1)4hr; (2)12hr; (3)冲流动相直到基线稳定 0.025 M硫酸 胺基HPX－72－O柱， 300×CH3CN 30%；EtOH，IPA 5% NaOH，KOH 甲醇，不同型式的其它阴离子 (1)5% 0.005M硫酸, (2) 30%乙氰的0.005M硫酸 0.2 ml/min 25℃ (1) 4 hr; (2) 6 hr 0. 2 M NaOH 胺基HPX－72S柱， 胺基HPX－87N柱， 胺基HPX－87K300×7.8mm 300×7.8mm 柱， 300×7.8mm CH3CN 40%；EtOH，CH3CN 30%；EtOH，CH3CN 30%；IPA 5% IPA 5% EtOH，IPA 5% 硫酸盐 甲醇，不同型式的其它阴离子 (1)5%乙氰的0.005M硫酸, (2) 30%乙氰的0.005M硫酸 0.2 ml/min 25℃ （1） 4 hr; （2） 6 hr 0.5M (NH4)2SO4， PH 9 硫酸钠 甲醇，酸，碱 硫酸钾 甲醇，酸，碱 胺基HPX－87C柱， 250×4mm CH3CN 40%；EtOH，IPA 5% 硫酸钙或硝酸钙 甲醇，酸，碱 草甘膦分析柱，100－300×7.8mm CH3CN 30%；EtOH，IPA 5% K2HPO4 碱,金属离子 有机改性剂（最大） 无机改性剂 避免 清洗溶剂 30%乙氰的0.01M Na2HPO4溶液 0.2 ml/min 25℃ 4 hr 0.020M Na2HPO4溶液 PH 9 30%乙氰的0.01M K2HPO4溶液 0.2 ml/min 25℃ 4 hr 0.020M K2HPO4溶液 PH 9 30%乙氰的水溶液 0.2 ml/min 25℃ 4 hr 运行流动相 0.01M Ca(NO3) 流速 温度 时间 再生溶剂 0.2 ml/min 50℃ 4 hr 0.005M K2HPO4, 4%甲醇 流速 温度 时间 贮运溶剂 0.2 ml/min 65℃ 4－16 h 0.005 M硫酸 0.2 ml/min 25℃ 4－16 h 0. 05 M NaOH 0.2 ml/min 25℃ 4－16 h 0.1M (NH4)2SO4 0.2 ml/min 85℃ 4－16 h 0.01M Na2HPO4 85℃ 4－16 h 0.01M K2HPO4 0.2 ml/min 85℃ 4－16 h 水 0.2 ml/min 50℃ 16 h 0.005M K2HPO4+4%甲醇 IPA ：异丙醇 第六部分：再生过程 6.1 松散树脂床
离子交换树脂是可以恢复原状的。平缓的反洗可以使塌陷的床层恢复到最初的结构或者使得混入的空气再次溶解。如果床层压缩太严重，柱子性能就不会回复到原始状态。
1 关掉泵 放松柱子床层大约15分钟。
2 反转流动方向，流动相以0.1ml/min的流速反洗柱子至少4小时，如果有必要，可以冲洗1晚上。 3 将柱子恢复到最初的操作条件 4 观测建议的最大流速 6.2 清洁被污染的柱子
许多由于溶剂、泵、柱入口处收集的样品中的小颗粒对柱子的污染可以通过反向冲洗柱子除去。这种方法对于由于细菌引起的污染也有效。
1 使用恰当的溶剂以0.1ml/min流速反向冲洗柱子至少4小时。 2使用合适的再生溶剂继续反向冲洗柱子约4小时。 3 恢复柱子到最初的操作条件。
如果有必要，更换末端零件。柱内的样品、离子相互作用（如碳酸钙）产生的小颗粒以及与底座强结合的化学污染物可以通过对出口堵塞的配件进行深入的清洗除去。根据步骤6.4进行出口和入口配件的拆卸。随后采用6.4中的步骤4，在纯水中对配件进行超声处理。指出的一点是当所有维修柱子的方法失败且对于复原柱子没有任何措施的时候，只能使用这种方法。
清洁或复原柱子时，为避免污染检测池，卸掉柱子和检测池之间的连接管。溶剂流过以后直接变成废液。
6.3 将主子恢复到最初的离子形式
离子交换树脂的离子形式发生变化时会收缩或膨胀。如果使用带相反电荷的缓冲溶液，柱子会变成另一种类型，从而解决背压过高的问题。大多数情况，并不全是这样，采用以下方法可以使柱子复原。
1 使用恰当的溶剂以0.1ml/min流速反向冲洗柱子至少4小时。 2 恢复柱子到最初的操作条件。 6.4 切掉拄床层
使用床层底座的情况非常少。而由于严重的高压可能会造成床层不可逆的塌陷。在柱头引起的空白空间经常需要使用Bio-Rad实验室的工具切除。为证实柱子问题是由于柱子进口处的空白引起的，分析无滞
留的物质（样品），观察分析峰的托尾情况。如果不确定，咨询技术服务部：1-800-424-6723或者联系Bio-Rad当地的办公室。
1 从HPLC系统上卸下柱子 2 4℃保存柱子3小时，不要结冰
3 松掉柱子末端液体流向箭头对面，柱子入口配件上的螺母
4 使用干净的压舌板仔细将同类型、同离子形式的树脂（直接从Bio-Rad公司买来的旧柱子上的）装入柱子空白空间并压紧。树脂应压成高于柱子末端约1mm的空心圆锥体。
5 更换末端配件拧紧防泄漏的螺母。 6恢复柱子到最初的操作条件。 6.5精馏工具、连接管路问题
很多情况下，分理效率差并不是由于柱子问题引起的，而是系统中其他硬件问题引起的。下面列出了可能出现问题的地方并提供了合理的限定值
1 注射器
样品体积： 最大100μm 回路体积： 最大500μm 2 连接管 配件没有被损坏 管末端切口是正方形 管末端是相匹配的 管直径 最大0.013’’ 管长 最大10’’ 3 检测器 干净的池子
池入口管最大直径0.013’’ 柱子与样品的连接没有参考侧 温度恒定 第7部分 关闭热柱子
高温分离后，将流速降至0.2ml/min后再关掉加热。等柱温下降至环境温度后再停止流动相。从系统中移走热柱子后，降温时，可能会造成溶剂体积缩小，而空气会随之进入到柱子中。
如果需要迅速的更换两根柱子。热柱子可以迅速放到过滤后新鲜的去离子水中。记得拧紧末端的紧固螺母以防树脂变干。
第8部分 存放柱子
关闭柱子末端配件时应确保已将柱中的空气排净。长期存放时，柱子应该冷藏以防柱子变干。但是不能被冻住。如果柱子可能几天不用，需按照以下步骤存放。
8.1 长期存放
1使用表2中列出的储存/运输溶剂作为流动相。更换流动相的流速应该比正常流速低。
2 紧紧的封住柱子末端，用最初的螺母装备柱子。这可以使柱子中的溶剂挥发很少，从而使得树脂保持湿润状态。
3 不用时，使用最初的运输用的箱子存放柱子。为防止溶剂挥发和产生细菌，树脂柱可以在℃储存（不要冻住）。
第9部分 常见问题及解决方案
表3是一些问题的解决方案，其中参阅了6.1-6.5列出的的再生的步骤。这些步骤在第6部分有详细的介绍。按表1、表2列出的规则操作可以使柱子的只用时间延长，任何不按规则的操作都可能就降低柱效、缩短柱子使用寿命。
表3 故障解决方案
故障 高 柱 压 原因 1.流速过高引起的床层塌陷 2化学杂质污染 3.气阻 4.微生物污染 5.离子形态变化 6.使用错误的有机溶剂后床层降解 分 离 度 下 降 1.机械颗粒污染 2. .离子形态变化 3. 流速过高引起的床层塌陷 4.床层压缩 5. .使用错误的有机溶剂后床层降解 6.死体积过大 特征 流速超过推荐流速后急剧的压力增长 使用过程中压力逐渐上升 贮存后重新使用 贮存后重新使用 改变缓冲液后压力迅速上升 溶剂改变后急剧的压力增长 柱效逐渐下降或保留改变 解决方法 停泵。完全松弛15分钟后按正常流速操作 反转流向，反洗 —— 反转流向，反洗 —— —— —— 再生程序 6.1 6.2 6.1 6.2 6.3 6.1 6.2 6.3 6.1、6.4 6.1、6.4 6.2 6.5 保留时间改变。这种改变有时—— 伴随柱效的突然下降。 保留时间不变，突然的柱效下停泵。完全松弛15分钟后按降、峰变形。 正常流速操作 保留时间不变，逐渐效率下降、峰拖尾 保留时间改变同时效率急剧下降 与测试的色谱图不一致
—— —— 检查所有仪器的连接