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无菌方法适用性试验记录
记录编号：
SOR-ZL-036-A/0 验证项目 无菌方法适用性试验 适用范围 无菌检查方法、检验程序或产品发生变化等均应进行无菌方法适用性试验。 标准依据 《中国药典》2015年版。 验证目的 产品无菌检查时所采用的方法是否适合于产品的无菌检查。 检验日期 完成日期 1、实验用培养基：
名 称 硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨液体培养基 培养基，121℃灭菌15min，灭菌后备用。 3、方法适用性试验菌株 名 称 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 大肠埃希菌CMCC(B) 44102 枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63501 生孢梭菌CMCC(B) 64941 白色念珠菌CMCC(F) 98001 黑曲霉 CMCC(F)98003 4、实验用仪器设备
编 号 来源 生产厂家 批 号 规 格 2、培养基制备：按规定程序新鲜配制硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体
□立式压力蒸汽灭菌器 型号： 编号： □净化工作台 型号： 编号： □生物安全柜 型号： 编号： □电热恒温培养箱 型号： 编号： □霉菌培养箱 型号： 编号： □电热鼓风干燥箱 型号： 编号：
5、菌液制备
5.1取经30-35℃培养18-24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养基新鲜培养物，分别用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液稀释为不大于100cfu/ml的菌悬液备用。 5.2取经30-35℃培养18-24h的生孢梭菌的硫乙醇酸盐流体培养基新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液稀释为小于100cfu/ml的菌悬液备用。
5.3取经20-25℃培养24-48h的白色念珠菌的沙式葡萄糖培养基新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液稀释为小于100cfu/ml的菌悬液备用。
5.4取经20-25℃培养5-7d的黑曲霉的沙式葡萄糖琼脂斜面培养基新鲜培养物，取3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，采用适宜的办法吸出孢子悬液至无菌试管里，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液稀释为小于100cfu/ml的菌悬液备用。 6、实验操作
6.1薄膜过滤法：取6管滤器按规定加入供试品接种量过滤，其中3管加入硫乙醇酸盐流体培养基，分别接种上述金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的菌液适量，另3管加入胰酪大豆胨液体培养基，分别接种上述枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉适量；再取6管滤器，3管加入硫乙醇酸盐流体培养基和分别接种上述金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的菌液适量，作为对照，置于规定温度培养不超过3d；另3管加入胰酪大豆胨液体培养基和分别接种上述枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉适量，作为对照，置于规定温度培养不超过5d，观察结果。
6.2直接接种法：取6支各装有9ml流乙醇酸盐流体培养基的试管，分别接种上述金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的菌液各2支，取6支各装有