发布时间 : 星期五 文章临床免疫学检验重点更新完毕开始阅读
区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。抗原抗体反应可分为两个阶段：第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应；第二阶段为可见反应阶段，这一阶段抗原抗体复合物在适当温度、pH、电解质和补体影响下，出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导等肉眼可见的反应，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。在血清学反应中，以上两阶段往往不能严格分开，往往受反应条件（如温度、pH、电解质、抗原抗体比例等）的影响 12、抗原抗体反应特点1、特异性：抗原抗体结合的特异性是指抗原表位与抗体超变区结合的特异性，一种抗原分子通常只能与其刺激机体产生的抗体结合。是由两者在化学结构和空间构型上呈互补关系所决定的。2.比例性：在抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。只有当抗原抗体分子比例合适时抗原抗体充分结合，沉淀物形成快而多，称为抗原抗体反应的等价带；若抗原或抗体极度过剩则无沉淀形成，称为带现象，抗体过量时，称为前带，抗原过剩时，称为后带。3.可逆性：可逆性指抗原抗体结合后形成复合物在一定条件下可发生解离，恢复抗原抗体的游离状态。4、阶段性是指抗原抗体反应分为特异性结合阶段和可见阶段。
13、抗原抗体结合力抗原抗体是一种非共价的结合，不形成共价键，需要四种分子间引力参与。 1.静电引力：又称库伦引力。是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。两个电荷距离越近，静电引力越大； 2.范德华引力：这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。这种引力的能量小于静电引力； 3.氢键结合力：是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。其结合力较强于范德华引力； 4.疏水作用力：水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。当抗原表位和抗体超变区靠近时，相互间正负极性消失，周围亲水层也立即失去，从而排斥两者间的水分子，使抗原抗体进一步吸引和结合。疏水作用力是这些结合力中最强的，因而对维系抗原抗体结合作用最大。 14、酶联免疫斑点ELISPOT细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现紫色的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。
15、免疫印迹法 WEStern原理：是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术，它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合。几乎任何蛋白质都可用于免疫印迹，免疫印迹的优势是能分析不能用其他的免疫化学技术进行研究的蛋白质样品。例如，不能标记的蛋白质或不溶于温和抽提缓冲液的蛋白质等。免疫印迹还可以分析各种组织、器官或微生物等来源的粗制样品。
步骤：第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极涌动，分子量越小，涌动的速度就越快。第二阶段为电转移。将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压和大电流，通电45min转移即可完成。此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。第三阶段为酶免疫定位。将印有但标致条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。阳性反应的条带清晰可见。
16、免疫组化的步骤基本过程：1抗原的提取与纯化 2免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化 3将标志物和抗体结合形成标记抗体 4标本的处理与制备 5抗原抗体免疫学反应以及标志物显色反应 6观察结果 标本的处理 抗原的保存与修复 抗体的处理与保存 免疫组化的结果判断 质量控制
17、时间分辨免疫荧光测定概念：是以镧系元素标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术相结合而建立起来的一种新型非放射性微量分析技术，具有灵敏度高，镧系元素发光稳定，荧光寿命长，不受样品自然荧光干扰，标准曲线范围宽等特点。原理：时间分辨、stokes位移、发射光谱和激发光谱、荧光标记物的相对比活性
18、特异性和非特异性显色1、特异性反应常分布在特定抗原部位，如细胞质、细胞核和细胞表面，具有结构性。非特异性反应无一定的分布规律，常为切片边缘、刀痕或皱褶部位，坏死或挤压的细胞区域，常成片均匀着色。2、非特异性反应由于细胞内抗原含量不同，特异性反应的显色强度不一。如果细胞之间显色强度相同或者细胞和周围结缔组织无明显区别的着色，常提示为非特异性反应。3、其他 在过大的组织块中，中心固定不良也会导致非特异性显色，有时可见非特异性显色和特异性显色同时存在，过强的非特异性显色背景可影响结果判断。
20、佐剂作用机制改变抗原物理性状，延缓其降解和排除，更有效刺激免疫系统。刺激单核-吞噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力。 刺激淋巴细胞增殖和分化。
21杂交瘤技术的基本原理：杂交瘤技术是利用聚乙二醇为细胞融合剂，使免疫后能产生抗体的小鼠脾细胞与能在体外长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，通过次黄嘌呤，氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷选择性培养基的作用，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养，最终获得既能产生所需单克隆抗体又能长期体繁殖的杂交瘤细胞系。将这种杂交瘤细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在小鼠腹腔积液中可得的高效价的单克隆抗体。
22用于细胞融合的理想骨髓瘤细胞：①细胞株为拟定，易于传代培养②细胞株本身不产生免疫球蛋白或细胞因子③该细胞是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转换酶的缺陷株④能和B细胞融合成稳定的杂交瘤细胞⑤融合率高。
23颗粒型抗原与可溶性抗原的区别：①天然的颗粒性抗原有细胞抗原，细菌抗原和寄生虫抗原等，制备方法比较简单，其具有较强的免疫原性，一般情况下不使用佐剂即可取得较好的免疫效果②蛋白质，糖蛋白，脂蛋白，核酸等均为可溶性抗原，这些抗原大多来于组织和细胞，成份复杂，免疫动物前需要进行提取和纯化，其与人工抗原初次免疫时必须使用免疫佐剂才能获得较好的免疫效果。
24佐剂的作用机制：①改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除，从而更有效的刺激免疫系统②刺激单核-吞噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力③刺激淋巴细胞增殖和分化，可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度④改变抗体的产生类型以及诱导迟发型超敏反应。
25酶联免疫吸附试验（ELISA）的基本原理：把抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性，也就是形成固相抗原或抗体。将抗原或抗体与酶连接成酶标记抗原或抗体，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性，测定时将受检样品和酶标记的抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体形成固相化抗原抗体-酶复合物；用洗涤的方法将固相载体上形成的抗原抗体-酶复合物与其他成分分离，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定比例，加入底物后，底物被固相载体上的酶催化生成有色产物，通过定量或定性检测有色产物的量即可确定样品中待测物质的含量。 26酶联免疫斑点试验（ELISPOT）：是一种既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量的方法，其原理是：用抗原包被固相载体，加入待测的抗体产生细胞，即可诱导抗体的分泌，分泌的抗体与包被抗原结合，在抗体分泌细胞周围形成抗原-抗体复合物，使细胞吸附于载体上，加入酶标记的第二抗体与细胞上的抗体结合，通过底物显色反应的深浅，可测定出生成的抗体量，并可在镜下计数着色的斑点形成细胞。
27 IBT或EITB：是一种将高分辨凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术，具有分析容
量大，敏感性高，特异性强等优点，是检测蛋白质特性，表达与分布的常用方法。