发布时间 : 星期三 文章气相色谱法在药典中的应用更新完毕开始阅读
W0.05hT=
2d1式中 W0.05h为0.05峰高处的峰宽；
d1为峰极大至峰前沿之间的距离。（如图4所示）
图4
除另有规定外，峰高法定量时T应在0.95～1.05之间。
峰面积法测定时，若拖尾严重，将影响峰面积的准确测量。必要时，应在各品种项下对拖尾因子作出规定。
（三）测定法
1. 内标法
按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：
AS/cS校正因子（f）=
AR/cR式中 AS为内标物质的峰面积或峰高；
AR为对照品的峰面积或峰高； CS为内标物质的浓度； CR为对照品的浓度。
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：
AX含量（cx）＝f?
A'S/c'S式中 AX为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；
CX为供试品（或其杂质）的浓度； A’S为内标物质的峰面积或峰高； c’S为内标物质的浓度； f为较正因子。
采用内标法，可避免因样品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。 2. 外标法
按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：
含量（cX）=cR
式中 CR为对照品的浓度； AR为对照品的峰面积或峰高；
AX为供试品（或其杂质）峰面积或峰高。
由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中成分或杂质含量时，以定量环或自动进样器进样为好。 3. 面积归一法
按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。
用于杂质检查时，由于峰面积归一化法测定误差大，因此，通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。 5. 标准溶液加入法
精密称（量）取某个杂质或待测成分对照品含量，配制成适当浓度的对照品溶液，取一定量，精密加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定杂质或主成分含量，再扣除加入的对照品溶液含量，即得供试液溶液中某个杂质和主成分含量。
也可按下述公式进行计算，加入对照品溶液前后校正因子应相同，即：
AXAR
Ais△cX?cX= AxcX△cXcX=
(Ais/AX)-1则待测组分的浓度cx可通过如下公式进行计算：
式中 cX为供试品中组分X的浓度；
AX为供试品中组分X的色谱峰面积；
△cX为所加入的已知浓度的待测组分对照品的浓度；
Ais为加入对照品后组分X的色谱峰面积。
由于气相色谱法的进样量一般仅数微升，为减小进样误差，尤其当采用手工进样时，由于留针时间和室温等对进样量也有影响，故以采用内标法定量为宜；当采用自动进样器时，由于进样重复性的提高，在保证分析误差的前提下，也可采用外标法定量。当采用顶空进样时，由于供试品和对照品处于不完全相同的基质中，故可采用标准溶液加入法以消除基质效应的影响；当标准溶液加入法与其他定量方法结果不一致时，应以标准加入法结果为准。
二 气相色谱法在鉴别中的应用
按各药品项下规定配置对照品溶液与供试品溶液，各取一定量，注入气相色谱仪，供试品溶液色谱中应呈现与对照品溶液色谱峰保留时间一致的色谱峰。
如在鉴别中药乳香中的索马里乳香，取[含量测定]项下挥发油适量，加无水乙醇制成每1mL含2.5mL的溶液，作为供试品溶液。另取对照品溶液。照气相色谱法（附录Ⅵ E）试验，以聚乙二醇（PEG-20M）毛细管柱，程序升温；初始温度50℃，保持3分钟，以每分钟25℃的速率升温至200℃，保持1分钟；进样口温度为200℃，检测器温度为220℃，分流比为20：1。理论板数俺α-蒎烯峰计算不低于7000，分别取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，供试品溶液色谱中应呈现与对照品溶液色谱峰保留时间一致的色谱峰。
又如丙戊酸钠片的鉴别，临用新制，取本品 10 片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉适量（约相当于丙戊酸钠0.5g),置分液漏斗中，加水10mL ，加稀硫酸5mL ，振摇使溶解，用二氯甲烷提取3次，每次20mL，合并二氯甲烷液，加无水硫酸钠适量，振摇，滤过，滤液置旋转蒸发器上蒸干（温度不超过30℃) ，加二氯甲烷适量， 振摇使残渣溶解，定量转移至100mL 量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液1mL，置10mL量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取丙戊酸钠对照品约10mg ，置分液漏斗中，加水10mL ，加稀硫酸5mL ，振摇，用二氯甲烷提取3次，每次20mL，合并二氯甲烷液，加无水硫酸钠适量，振摇，滤过，滤液置旋转蒸发器上蒸干（温度不超过30°C) ，精密加入二氯甲烷20mL ，振摇使残渣溶解，摇匀，作为对照品溶液。照有关物质项下的色谱条件，精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μL，分别注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
[3]
[2]
三 气相色谱法在检查中的应用
（一） 内标法（内标校正因子法和内标工作曲线法）
可消除进样量不准确误差，GC进样量一般为1μL，液相是10μL、20μL，GC更易出现进样误差，自动进样器准确度可满足要求，手动进样最好用内标法定量。需要内标物。按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各适量，混
合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按按本文第二部分所述方法计算结果。
如检查二甲基亚砜中德二甲基砜，取本品，精密称定，用内标溶液（0.025%二苯甲烷的丙酮溶液）稀释制成50%，作为供试品溶液；取二甲基砜对照品适量，精密称定，用上述内标溶液稀释制成0.050%的溶液，作为对照品溶液，照气相色谱法（附录Ⅴ E）试验，以10%聚乙二醇20M为周定液，柱温为150℃，理论板数按二甲基砜峰计算不低于1500，二甲基砜峰与内标峰的分离度应大于2.0。精密量取供试品溶液与对照品溶液各2μ1，分别注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液中二甲基砜与二苯甲烷峰面积的比值，不得大于对照品溶液中二甲基砜与二苯甲烷峰面积的比值。
[4]
（二） 外标法（外标一点法和工作曲线法）
按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按本文第二部分所述方法计算结果。
如检查艾片（左旋龙脑）中异龙脑和樟脑，取本品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1mL含15mg的溶液，作为供试品溶液。另取异龙脑对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法（附录Ⅵ E）试验色谱条件与系统适用性试验聚乙二醇20000(PEG一20M)毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1.0μm)，柱温为170℃。理论板数按龙脑峰计算应不低于3000。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。本品含异龙脑(C10H18O)不得过5.0％。樟脑取[检查]异龙脑项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取樟脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照前述方法测定，计算，即得。本品含樟脑(C10H16O)不得过10.0％。
[5]
（三）面积归一法
粗略考察，需全部出峰且都被检测到，溶剂峰去掉，不易用于微量杂质的检查，一般用于同系物的含量测定。
如甘油（供注射用）检查中二甘醇、乙二醇与其他杂质，取本品约10 g ，精密称定，置25mL 量瓶中，精密加入内标溶液（每1mL 中含0.5mg 正己醇的甲醇溶液）5mL，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。取二甘醇、乙二醇适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释制成每1mL, 中含二甘醇、乙二醇各0 . 5mg 的溶液。精密量 取5mL ，置25mL 量瓶中，精密加入内标溶液5mL, 用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。另取二甘醇、乙二醇、正己醇和甘油 适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释制成每 1mL 中含甘油400mg、二甘醇、乙二
[6]