发布时间 : 星期六 文章提取分离纯化苦参中氧化苦参碱的工艺研究更新完毕开始阅读
苏州大学本科生毕业设计（论文）
A洗脱液 B洗脱液 C洗脱液
950 1055 1225
3401.56 5493.24 4178.74
54.29 87.68 66.70
注：柱前液中氧化苦参碱的含量记为100%
结果：B大孔吸附树脂对氧化苦参碱有较强的吸附效果，并被90%乙醇洗脱，转移量为5493.24mg，转移率高达87.68%。
选择树脂量为600ml由树脂柱的大小决定，600ml树脂约占柱高的1/3,
A大孔吸附树脂是中极性树脂，属于中药专用树脂，适用范围是三七皂苷、绿原酸、原花青素、花色苷、广枣黄酮、沙棘黄酮等化合物，B大孔吸附树脂是极性树脂，适用于生物碱类化合物。C大孔吸附树脂是极性树脂，属于中药专用树脂，适用范围是甜叶菊、茶多酚、蒽醌类、酚类、咖啡因、有机酸、黄酮类等化合物。氧化苦参碱、苦参碱是高极性的化合物，根据相似相容原理，在选用树脂时选择了中极性和极性的树脂，而没有选用极性较弱的大孔吸附树脂。因为还没做有关洗脱浓度的考察，选择极性高的90% 乙醇洗脱，根据相似相容原理氧化苦参碱易溶于极性高的溶液，90% 乙醇极性高易于把氧化苦参碱洗脱下来。 2 苦参树脂正交
所有的组别树脂量均为600ml，树脂为B大孔吸附树脂
选取上柱量、上柱pH、乙醇洗脱浓度为考察因素，以氧化苦参碱总转移率为指标，采用L 9(34 )正交表安排试验。
表8：苦参树脂正交因素水平表
水平\\因素 1 2 3
上柱量（g） 300 400 500
上柱pH 5 7 9
乙醇洗脱浓度（%） 70 80 90
称取苦参饮片（氧化苦参碱含量3.25%）6份每份600g，将饮片处理成1~2厘米的片段，用3个电热套分2次提取，提取时加水量为14+12倍量，提取时间为1+1小时。将6份的提取液合并，放凉沉淀后抽取上清液，上清液共52.4L。柱前液取样用HPLC法测定其氧化苦参碱的量。根据上柱量的不同将分为：6L（300g）、6.8L（400g）、8.7Lml（500g）。根据每组不同的pH用5% HCl或者2% NaOH 调pH至所规定的值。上柱速度为3BV/h，洗脱也按照规定的乙醇浓度来洗脱，洗脱量为2BV，洗脱速度为1BV/h。洗脱液用HPLC法测定其氧化苦参碱量，并计算各组的氧化苦参碱转移率。各组别均按下表所示。
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表9：苦参树脂正交表
组别\\因素
上柱量（g） 上柱pH
乙醇洗脱浓氧化苦参碱除杂率度（%）
1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 R
300 300 300 400 400 400 500 500 500 236.97 170.73 128.4 36.19
5 7 9 5 7 9 5 7 9 179.28 208.58 148.24 60.34
70 80 90 90 70 80 80 90 70 180.61 184.26 171.23 4.34
转移率（%） （%） 78.58 91.15 67.24 54.96 68.40 47.37 45.74 49.03 33.63
75.36 76.95 79.47 79.91 81.26 82.29 81.78 83.00 83.76
注：氧化苦参碱转移率是相对于柱前液的转移率
表10：苦参树脂正交方差分析
方差来源 上柱量 上柱pH
平方和 1996 607
自由度 2 2 2 2
均方 998 303.5 15 3.5
F值 270.9 82.3 4.1
乙醇洗脱浓度 30 误差
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由表10看出，上柱量和上柱pH的F值均大于18成高显著性，可以得出这两个变量对氧化苦参碱的转移率都有很大的影响，第2组即300g药材量、pH 7的上柱液、80% 乙醇洗脱氧化苦参碱的转移率最高，且该条件下的除杂率也很高有83.00%。
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第三章 最佳工艺重现
在上述试验中确定了最佳的树提取分离氧化苦参碱的工艺，现对其进行3次重现。 称取2400g苦参（氧化苦参碱含量3.86%），14+12倍量的40% 乙醇回流提取1.5+1.5小时，提取液放冷抽取上清液，调pH至7，回收其中乙醇加水至上清液的原体积，上柱，上柱速度2BV/h，水洗2BV速度为2BV/h，2BV 80% 乙醇洗脱速度为1BV/h。
表11：最佳树脂工艺重现（1）
名称
体积（L）
氧化苦参碱质转移率（%） 量（mg）
水煎液 柱前液 上柱流出液 水洗液
58.0 55.0 53.0 6.0
78790.16 74891.88 2133.82 3085.98 63889.51
85.05（相对药材） 100（相对柱前） 2.84（相对柱前） 4.12（相对柱前） 85.30（相对柱前）
80%乙醇洗脱液 10.5
表12：最佳树脂工艺重现（2）
样品名
体积（L）
氧化苦参碱质转移率（%） 量（mg）
水煎液 柱前液 上柱流出液 水洗液
53.5 52.4 51.5 6.3
81472.77 76131.74 2375.22 3248.43 64541.57
87.95（相对药材） 100（相对柱前） 3.11（相对柱前） 4.26（相对柱前） 84.77（相对柱前）
80%乙醇洗脱液 11.3
表13：最佳树脂工艺重现（3）
样品名
体积（L）
氧化苦参碱质转移率（%） 量（mg）
水煎液 柱前液 上柱流出液 水洗液
54.2 51.4 51.5 5.5
80994.87 76386.25 2435.35 3096.56 66014.26
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87.43（相对药材） 100（相对柱前） 3.19（相对柱前） 4.05（相对柱前） 86.42（相对柱前）
80%乙醇洗脱液 11.0
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试验结果表明该工艺有良好的重现性和可行性，提取率85%左右，树脂柱的转移率在80%以上，能够重现最佳提取和树脂纯化工艺正交筛选结果。
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