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篇一：生物化学实验报告 2012年生物化学实验b
姓 名：学 号：实验时间：实验分组：组内成员： 任课教师：实验报告 xxxx 2012年11月17日 摘要
1. 实验部分 1.1试剂与仪器 1.试剂：
（2）1 mol/l 醋酸，1 mol/l naoh，硫酸铵。 （3）平衡缓冲液：0.01 mol/l tris-hcl，ph 8.0。
（5）酶的底物溶液：用底物缓冲液配制15×10-3 mol/l 对硝基苯磷酸二钠溶液。 （7）分离胶缓冲液：1.5 mol/l tris-hcl缓冲液，ph 8.8，已加入10% sds。 （8）浓缩胶缓冲液：0.5 mol/l tris-hcl缓冲液，ph 6.8，已加入10% sds。
（13）脱色液：500 ml 10%甲醇和10%冰醋酸的脱色液1000 ml。 匀浆机、eppebdorf5型冷冻离心机、gsy—2型恒温水浴、uv762型紫外可见分光光度计。 1.2 小牛肠碱性磷酸酶提取方法
2）将小肠粘膜液集中倒入匀浆机中，加冰冷蒸馏水，高速匀浆，重复多次。 3）缓慢加入冰冷正丁醇高速匀浆重复多次。在4℃，10000 rpm条件下离心。 4）用滤布过滤去除杂质，倒入分液漏斗中，静止分层，取下层水相，用hac溶液调ph到4.9。 5）得到上清后放入离心管中，用naoh溶液调ph至6.5，称取硫酸铵加到离心管中溶解；再加冰冷丙酮，混匀，4℃静置30 min以上。 6）上清液中加入冰冷丙酮，4℃放置30 min以上。4℃，10000 rpm，离心。 7）取沉淀溶于平衡缓冲液至全部溶解至冰箱保存待用。 1.3 小牛肠碱性磷酸酶酶活检测方法
2）紫外分光光度计检测条件为405 nm波长，测定时间60 s，取值2 s，记录范围0.0-1.5。
上下倒2次，放回分光光度计中，测定酶动力学曲线 1.4 聚丙烯凝胶制备
分离胶制备（浓度10%，制备量10 ml） 试剂 用量 h2o 30% 丙烯酰胺
1.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 8.8 10% 过硫酸铵 temed
4.1 ml 3.4 ml 2.4 ml 100 μl 10 μl 浓缩胶制备（浓度5%，制备量6 ml） 试剂 h2o 30% 丙烯酰胺
0.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 6.8 10% 过硫酸铵 temed
用量 3.4 ml 1.0 ml 1.5 ml 60 μl 8 μl 1.5 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
3）各取100 μl加入到5 ml考马斯亮蓝试管中，混匀，反应5 min以上。
5）取2个比色皿，加入考马斯亮蓝，分光光度计中校对归零。 6）将样品放入外侧比色皿中，读吸光值。
1.6 sds-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量
5）观察测定蛋白的迁移率及条带，对照标准样品，分析蛋白样品的分子量及纯度。
2. 结果与讨论
2.1小牛肠碱性磷酸酶酶活检测 根据酶动力计算公式： ?a/min ? vr ? d 比活力（u/mg）＝ e405 ? ve ? c ? l
根据上图，?a/min=3.5/min； vr=1.50002ml； d=10；
e405=18.3l/(mol*cm)； ve=0.00002ml； c=19.35mg/ml. l=0.5cm； 所以比活力（u/mg）=1.48*10u/mg； 4
2.2 sds-聚丙烯凝胶电泳
2.3考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
2.4小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活测定一些问题的讨论 1、测定底物浓度对酶反应速度的影响时，对酶反应的哪些条件要加以控制？本实验所取的条件是什么?
答：要对反应温度，酶浓度进行控制，本实验中反应温度为37℃，酶浓度为在原来
2、为什么实验中能以平均速度表示反应的瞬时速度?
答：因为酶催化的反应速率与底物浓度有关，本实验中底物远远过量，所以可以
3、你认为实验中的关键步骤或值得注意的步骤是什么？
4、本次实验的感受是什么？
2.5 sds-page电泳法测定蛋白质相对分子质量一些问题的讨论
1、用sds－聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量时为什么要用巯基乙醇？
2、sds在该电泳方法中的作用是什么？
答：在sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，加入一定量的十二烷基硫酸钠 （sds），形成蛋白质-sds复合物，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成了仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间的天然的电荷差异，此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于蛋白质的分子量大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。
答：本实验中我们组的mark样品只有三条标记线，是分子量最多的三条，说明分子量小的蛋白质电泳进行得快，超出了凝胶的范围，所以没有在图像上有所体现。 参考文献：
[1]修志龙等.生物化学[m].化学工业出版社.2008.
[2]许文涛等.sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳快速染脱色方法的比较研究.食品科学[j]. 2004,vol.25.no.增
{3}孙士青等.考马斯亮蓝法快速测定乳品中蛋白质含量.山东科学[j].2011.24(6) [4]栾雨时, 包永明..生物工程实验技术手册[m].化学工业出版社.2005 篇二：生物化学实验记录和实验报告的书写 第二节 实验记录和实验报告的书写
正确记录实验过程及书写实验报告，是训练学生进行正规实验训练的重要内容。实验是在理论指导下的科学实践，目的在于经过实践，掌握科学观察的基本方法和技能，培养学生的科学思维、分析判断和解决实际问题的能力。
一、实验记录
实验中观察到的现象、结果和数据，耍及时地直接记在记录本。
记录时，应做到如实正确记录实验结果，不可夹杂主观因素。在实验条件下观察到的现象，也应如实仔细地记录下来。在定量实验中观测到的数据，如称量物的重量、滴定管的读数、光电比色计的光密度值等，都应设计一定的表格准确记录。并应根据仪器的精确度准确记录有效数字。
实验中使用仪器的类型、试剂的规格、化学反应式、分子量、浓度等，都应记录清楚。
二、实验报告
书写实验报告时，目的和要求、原理以及操作方法部分应作简单扼要的叙述，但对实验条件和操作的关键环节必须写清楚。对于实验结果部分，应根据实验的要求，把所得的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和对比，并尽量总结成各种图表，如标准曲线图以及实验
组与对照组实验结果的比较表等。
1. 实验报告的书写包括哪些内容？ 2. 玻璃仪器的清洗有哪些基本要求？
3. 请分别叙述分光光度技术、层析技术、电泳技术原理、及实验注意事项 4. 血液样品、尿液样品及组织样品制备的常用方法有哪些？ 实验八 血清乳酸含量的测定（乳酸脱氢酶法） 实验目的
实验原理
乳酸脱氢酶（ld）在辅酶i(nad)存在下将乳酸氧化成丙酮酸，同时伴有nad转化成还原型辅酶i（nadh），其反应式如下：
l－乳酸＋nad＋ld丙酮酸＋nadh＋h＋ 在ph值为9.8时，平衡偏向乳酸氧化为丙酮酸一方。加入肼或氨基脲与丙酮酸生成产物而使丙酮酸不断被除去，使反应进一步向右移动，从而驱动反应完成。通过分光光度法（γ＝340nm）或荧光法测定nadh的生成量来测得样本中乳酸得量。 实验器材
1. 分光光度计 2. 试管 3. 移液管 4. 恒温水浴箱 5. 注射器 6. 离心机 实验试剂 1. tris－edta－肼缓冲液 将三羟甲基氨基甲烷（tris）60.5g和乙二胺四乙酸（edta）4g溶解于800ml水中，加水合肼11ml，调ph值到9.8，再定容到1000ml。 2. 0.1mmol/l辅酶i 称辅酶i65.4mg，加塞保存于－20℃。
实验步骤
1. 标本采集：为了避免血液乳酸在采血时发生变化，受试者应处于空腹休息状态，最好不用止血带以防止前臂缺氧而致乳酸含量增加。进针后不立即采血，等几分钟后再采血，然后放入预置有碘乙酸钠的标本管中，碘乙酸钠的最终浓度为0.05％。 2. 取10x100cm小试管3只，分别写清测定管，标准管和空白管，然后按下表进行操作。 血清乳酸脱氢酶法测定乳酸操作表（单位：ml） 结果分析
血清中乳酸量＝?as/minx标准管乳酸浓度（mmoml/l） 安静状态下，健康人静脉血内乳酸含量为0.5~2.2mmoml/l，动脉血乳酸水平低于静脉血。 脑脊液乳酸水平为1.1～2.8mmoml/l
乳酸是糖酵解的最终产物，在生理条件下，大多数组织以有氧氧化为主，但少数组织如
皮肤，视网膜，肾髓质和血细胞等组织在有氧时也能进行糖酵解，其中以皮肤的糖酵解速度最快。
在病理情况下，如严重贫血、大量出血、呼吸障碍及心血管疾患等所引起的机体缺氧时，致使糖酵解过度，造成乳酸生成过多，导致机体产生乳酸酸中毒。运动时乳酸主要在骨骼肌中生成，然后透过细胞膜进入血液。在正常情况下，乳酸在生成和消除处于动态平衡中，血乳酸浓度为1-2mmol/l，运动员血乳酸安静值与常人无差异，但是在赛前情绪紧张时，血乳酸浓度安静值有可能升高到3mmol/l左右，这与肾上腺分泌增多有关。运动时血乳酸浓度上升，上升的起始运动强度约在50%-60%vo2max，耐力运动员由于有氧代谢能力强，升高的起始强度推迟到60%-70%vo2max。运动时血乳酸浓度的变化与运动强度有关。剧烈运动时，肌肉内糖的无氧分解加强，血乳酸浓度显著升高。运动时血乳酸浓度的变化与所动用的能量系统有关。
速度耐力性运动项目的高水平运动员，运动成绩好者，运动后血乳酸最大浓度值也高；耐力性运动项目的运动员，在完成相同亚极量运动负荷时，优秀运动员运动后血乳酸相对较低。根据这一特点可用以评定运动员训练水平或选材。可根据运动后血乳酸的消除速率来评定运动员有氧代谢能力，若恢复速度快，表示有氧代谢能力强。 注意事项
血乳酸测定时取样时间非常重要，安静值应在早晨起床前安静时采样；运动后血乳酸的测定应根据不同运动项目而定，一般运动强度较低的运动在运动后20s左右取样，中等强度运动在运动后1～6min取样，大强度运动在运动后3～12min取样。