发布时间 : 星期六 文章【高考一轮】2018届高考生物一轮复习：第34讲 课后分层训练(含答案)更新完毕开始阅读
入其中；质粒上还含有________，供重组DNA的鉴定和选择。
(3)图中切割人胰岛素基因和质粒的酶(酶A)相同，其目的是____________，将重组DNA分子导入大肠杆菌前，常需用________处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
(4)由于大肠杆菌中没有____________等结构，其内合成的人胰岛素没有活性，需要经过再加工。
解析 (1)获取目的基因的方法除题图所示方法外，还有人工合成。(2)图示所获得的人胰岛素基因由于不含启动子和终止子，因此需要运载体——质粒提供。质粒上还应含有一个或多个限制酶切割位点，供目的基因插入其中；质粒上还含有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。(3)用同一种限制酶切割目的基因和质粒，以便获得相同的末端。将重组DNA分子导入大肠杆菌前，需用Ca2＋处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。(4)由于大肠杆菌中没有内质网、高尔基体等结构，其内合成的人胰岛素没有活性，需要经过再加工。
答案 (1)人工合成 (2)启动子、终止子 限制酶 标记基因 (3)获得相同的末端 Ca2＋ (4)内质网、高尔基体
6.基因工程中，需使用特定的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性核酸内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，根据图示判断下列叙述错误的是( )
A.用限制性核酸内切酶切割获得目的基因时，有四个磷酸二酯键被水解 B.质粒用限制性核酸内切酶Ⅰ切割，目的基因用限制性核酸内切酶Ⅱ切割 C.限制性核酸内切酶Ⅰ和限制性核酸内切酶Ⅱ切割后获得的黏性末端相同 D.质粒中的标记基因便于筛选出目的基因已经表达的细胞
解析 将目的基因切割下来需要切断四个磷酸二酯键，故A对；质粒如果用酶
Ⅱ切割，质粒上的两个标记基因都将会被破坏，所以只能用酶Ⅰ切割，故B对；根据题意可知二者产生的黏性末端相同，故C对；质粒中的标记基因的作用是用来筛选含有目的基因的受体细胞，故D错。 答案 D
7.下图是利用转基因技术培育抗病小麦的过程。请据图回答问题。
(1)重组质粒T除含有目的基因外，还必须有________、________和________等。
(2)图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是________________________________________________。 (3)在步骤⑤⑥中都需用________处理。为了确认目的基因通过⑦导入植物细胞后是否转录，通常采用________法进行检测；验证目的基因导入受体细胞后是否成功表达，通常采用________法从分子水平进行检测。
(4)假设该抗病基因D，通过基因工程导入小麦后连接到小麦的一条染色体上，则该小麦进行减数分裂的细胞在联会时有________个D基因
解析 (1)重组质粒T除含有目的基因外，还必须有启动子、终止子和标记基因。(2)图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是获取大量重组质粒(让目的基因扩增)。(3)将目的基因导入细菌细胞时，需要用Ca2＋处理，使其成为易于吸收周围环境中DNA的感受态。因此步骤⑤⑥中都需用Ca2＋处理。从分子水平检测目的基因是否转录，常采用分子杂交法；验证目的基因是否表达，通常采用抗原－抗体杂交法。(4)假设该抗病基因D，通过基因工程导入小麦后连接到小麦的一条染色体上，在减
数第一次分裂间期小麦细胞中进行了DNA复制，因此联会时细胞中有2个D基因。
答案 (1)启动子 终止子 标记基因 (2)获取大量重组质粒(让目的基因扩增) (3)Ca2＋ 分子杂交 抗原－抗体杂交 (4)2
8.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有几个游离的磷酸基团？_______________________________________________________________。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越低还是越高？_______________________________________________________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，能否使用Sma Ⅰ切割？为什么？_______________________________________________________________。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止
______________________________________________________________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
解析 (1)质粒是双链环状DNA分子，在Sma Ⅰ切割前没有游离的磷酸基团，Sma Ⅰ作用于两个核苷酸之间的磷酸二酯键，切割产生的DNA片段末端是平末端，因而质粒经切割后含有2个游离的磷酸基团。(2)质粒的热稳定性主要由氢键的数量决定，氢键数量越多，质粒的热稳定性越高，反之则低，DNA双链中A与T之间存在2个氢键，C与G之间存在3个氢键，因此DNA分子中G—C碱基对越多，热稳定性就越高，Sma Ⅰ识别CCCGGG序列，并在C和G之间将这段序列切开，也就是质粒中Sma Ⅰ酶切位点越多，G—C碱基对越多，热稳定性越高。(3)据图1可知，Sma Ⅰ切割的位点在抗生素抗性基因之中，抗生素抗性基因是标记基因，应尽量避免破坏，据图2可知Sma Ⅰ切割的位点在目的基因之中，破坏了目的基因，所以不能使用Sma Ⅰ切割。(4)用同种限制酶切割后的质粒和目的基因，在基因表达载体构建时，常形成三种连接方式，其中目的基因与目的基因的连接、质粒与质粒的连接是无效的连接，用两种限制酶可避免此类现象。(5)基因表达载体的构建过程中需加DNA连接酶，连接脱氧核糖和磷酸。(6)抗生素抗性基因属于标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。(7)目的基因是蔗糖转运蛋白基因，将其导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体后，应进行目的基因的检测与鉴定，可根据受体细胞是否含有蔗糖转运蛋白，即是否具备吸收蔗糖的能力判断基因工程是否成功，因而可在含有蔗糖(唯一碳源)的培养基中培养。 答案 (1)0、2 (2)越高