发布时间 : 星期三 文章微生物学实验讲义 - 图文更新完毕开始阅读
（六）思考题
1. 为什么微生物实验室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞上一小段棉花，再用报纸包起来，经高压蒸汽灭菌后才能使用？
2. 为什么微生物实验室所用的锥形瓶口或试管口都要塞上棉塞，经高压蒸汽灭菌后才能使用？制作合格棉塞的标准是什么？ 3. 配制培养基时为什么要调节pH?
4. 配制固体培养基时，需在液体培养基中添加多少量的琼脂？ 5. 将含琼脂的培养基分装至试管中应如何操作？注意事项是什么? 6. 制作斜面培养基时，其斜面长度应相当于试管长度几分之几为宜？ 7. 制作平板培养基的注意事项是什么？
8. 培养基配好后，为什么必须马上进行高压蒸汽灭菌?如不能及时灭菌时，应将培养基暂时放置何处？
9. 如何检查灭菌后的培养基是否无菌？
二、细菌、放线菌常用培养基的配制
(一)目的要求
了解半合成和合成培养基的配制原理。
学习和掌握牛膏蛋白胨培养基、LB培养基和高氏合成Ⅰ号培养基的配制方法。 （二）基本原理
牛肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的培养基。而LB培养基则是一种近年来用于培养基因工程受体菌(大肠杆菌)的常用培养基。两者都属于半合成培养基。牛肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。而LB培养基的主要成分是胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl。它们分别提供微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、生长因子和无机盐等。培养基都是水溶液，这是因为一切生物细胞都必须要水，蒸馏水不含杂质，比自来水好，特别是配制合成培养基时都必须用蒸馏水，配天然培养基时可用自来水，但自来水中常含Ca，Mg离子，易与其它成分形成沉淀。
高氏合成Ⅰ号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源，KNO3作为氮源，K2HPO4、MgSO4和Fe2SO4为无机盐等。
（三）实验材料 1. 药品
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、胰蛋白胨(bacto-tryptone)、酵母提取物(bacto-yeast extract)、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4、Mg2SO4·7H2O、Fe2SO4·7H2O、琼脂等。 2. 溶液
1mol/L NaOH、1mol/L HCl、0.1％Fe2SO4·7H 2O。 3. 仪器
天平、高压蒸汽灭菌锅。
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2+
2+
4. 玻璃器皿
移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 5. 其它物品
药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。
（四）实验步骤
1. 肉膏蛋白胨培养基的配制
1）培养基成分
牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g，琼脂1.5～2g，水100 ml，pH 7.2。 2）配制方法
称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量2/3左右的蒸馏水；用玻棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量，然后加入少量蒸馏水，加热溶化，倒入上述烧杯中。将烧杯置于石棉网上加热，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。 调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。 定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。 加琼脂：加入所需量的琼脂，加热融化，补充失水。 分装、加塞、包扎。
高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20 min。
2. 高氏合成Ⅰ号培养基的配制 1）培养基成分
可溶性淀粉2g，KNO3 0.1g，K2HPO4·3H2O 0.05g，NaCl 0.05g， MgSO4·7H2O 0.05g，Fe2SO4·7H2O 0.001g，琼脂1.5～2g，蒸馏水100 ml，pH7.2～7.4。
2）配制方法
称量及溶化：量取所需水量的2／3左右加入到烧杯中，置于石棉网上加热至沸。称量可溶性淀粉，置于另一小烧杯中，加入少量冷水，将淀粉调成糊状，然后倒入上述装沸水的烧杯中，继续加热，使淀粉完全溶化。
分别称量KNO3、NaCl、K2HPO4和MgSO4，依次逐一加入水中溶解。按每100 m1培养基加入0.1％Fe2SO4溶液1ml。
调pH：用1mol/L NaOH溶液调pH至7.4。 定容：将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。
加琼脂：加入所需重量的琼脂，加热融化，补充失水。 分装、加塞、包扎。
高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20 min。
（五）实验报告内容
1. 记录你所配制培养基的名称及成分。
2. 分析你所配制培养基的碳源、氮源、能源、无机盐及维生素的来源。
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（六）思考题
1. 培养细菌一般常用什么培养基? 2. 培养放线菌常用什么培养基? 3. 何谓半合成培养基?何谓合成培养基? 4. 牛肉膏应置于何种容器中称量为宜?
5. 配制高氏合成Ⅰ号培养基时，可溶性淀粉需经什么处理后才能倒入到沸水中?
三、酵母菌、霉菌常用培养基的配制
（一）目的要求
了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。
学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。
（二）基本原理
麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养。
察氏培养基主要用于培养霉菌进行形态观察。麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。
（三）实验材料 1. 药品
葡萄糖、蔗糖、NaNO3、K2HPO4、KCl、Mg2SO4·7H2O、Fe2SO4、琼脂。 2. 仪器
天平、高压蒸汽灭菌锅。 3. 玻璃器皿
移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 4. 其它物品
药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、
新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。
（四）实验步骤
1. 马铃薯葡萄糖培养基的配制 1）培养基成分
马铃薯20 g，葡萄糖2g，琼脂1.5～2g，水100 m1，自然pH。 2）配制方法
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配制20％马铃薯浸汁：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。100℃煮沸半小时，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。121℃灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，存备用。
配制：按每100ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化，并补足失水。
分装、加塞、包扎。
高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20 min。
2. 豆芽汁葡萄糖培养基的配制 1）培养基成分
黄豆芽10g，葡萄糖5g，琼脂1.5～2g，水100 ml，自然pH。 2）配制方法
称量熔化：称新鲜黄豆芽10 g，置于烧杯中，再加入l00ml水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成l0％豆芽汁。
配制：按每100ml 10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化，补足失水。
分装、加塞、包扎。
高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20 min。
（五）实验报告内容
记录你所配制培养基的名称及成分。 （六）思考题
1. 马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基常用于培养哪类微生物？ 2. 何谓培养基的自然pH？
四、高压蒸汽灭菌
（一）目的要求 了解高压蒸汽灭菌原理。
学习并掌握高压蒸汽灭菌的操作。
（二）基本原理
高压蒸汽灭菌是微生物学实验、发酵工业生产、以及外科手术器械等方面最常用的一种灭菌方法。一般培养基、玻璃器皿、无菌水、无菌缓冲液、金属用具、接种室的实验服及传染性标本等都可采用此法灭菌。
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