发布时间 : 星期二 文章2012.4.4樱花物候期的观察更新完毕开始阅读
2、用具：镊子每人一把，培养皿每组2 套、标签2 个。 三、方法和步骤： 1、摘药采粉
采回含苞待放的花蕾，在室内取下花药，待散粉后收集花粉，是园林植物最常用的方法。在使用这种方法时应掌握以下几点： ( 1 )采集花蕾的数量
根据母本授粉花朵数和父本花含量的多少而定。据过去的经验：百合、贴梗海棠、油菜、桃的花粉较多，一个花蕾的花粉可授5 朵花；菊花、一串红、李的花粉较少，一个花蕾的花粉可授3 朵花。一般采集的花蕾的数量要适当多些，保证有足够的花粉。
( 2 )适时采集花蕾
正常情况下，花蕾的采集应在含苞待放时进行，也可掌握花药成熟时的颜 色，未确定采蕾时期。如：梨成熟的花药为紫红色；贴梗海棠、苹果、葡萄成熟的花药为淡黄色；桃成熟的花药为红褐色或褐红色；核桃成熟的花药为黄色。 ( 3 )催粉
把花药置于温暖干燥的地方晾干或在日光下晒干。阴雨天时，应在火炉附近或电灯下进行催粉。花药处温度在25 ℃ 左右。一般情况下室内晾干的花蕾12 一36 小时散粉，花粉生活力最强；日光下催粉的花蕾4 一10 小时，符合植物自然散粉条件；电灯光下、火炉旁25 ℃ 下催粉的花蕾8 一12 小时散粉；温箱23 ℃ 一25 ℃ 下催粉的花蕾18 一35 小时散粉。
2 、插枝采粉
一般用于风媒花植物毛白杨、核桃等（花粉多、花粉粒细小、质轻）。在散粉前1 一2 天，采回花枝，插入盛有清水的瓶中，待其自然散粉时收集。
注意：采集花枝不宜过早，枝条不宜过细，以免花药萎缩，不能散粉。如：早春将毛白杨的花枝采回，插入室内盛有清水的瓶中，在花枝下衬以光滑的纸，待花药开裂有花粉散出时，用小木棒轻击花枝，使花粉落在纸上然后收集。毛白杨不但要切枝采粉，为了调整杂交高度，便于管理，可进行切枝杂交（母本也采花枝）( 2 月底进行)。但母本花枝不宜太细，要以能保证种子充分成熟所需的营养为前提。并要经常换水，修剪枝条切口的分泌物。 3 、套袋采粉
一般用于花小而密，摘药麻烦的植物种类，如毛白杨、葡萄、枣等。选初花期花序，疏除已开放的花，用隔潮的纸袋套上，2 一3 天后振动纸袋，使花粉落入袋中，
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轻轻摘下纸袋备用。这样的纸袋采粉后，不能重叠堆放，以防花粉发霉而丧失生活力。也可将花粉收集在一起，捡出杂质，贮藏备用。 四、作业
每人采集桃（一串红、月季等）花粉一份，并写出采集时的注意事项。
实验八 花粉生活力的测定
一、目的要求：
花粉必须经过测定生活力后，才能确定是否可以作为杂交授粉之用。对没有确定生活力大小及有无生活力的花粉如果盲目使用，就会导致杂交工作的失败或无法对杂交结果进行可靠的分析。本实验就是学习并掌握用形态法、染色体法、发芽法测定花粉生活力的具体技术和方法。 二、材料、用具和试剂：
1 、材料：桃、百合、牡丹、油菜、贴梗海棠、一串红、月季、韭叶兰等的花粉。 2 、用具：每组电炉一个、电子天平一台、玻璃棒一支、玻璃铅笔一支、带盖白瓷盘一个、干棉球若干、白纱布一块、镊子两把、酒精灯一个、烧杯250ml 两个、500ml 两个、滴瓶6 个、量筒5 ml、10ml 、10Oml 、5O0ml 各一个、大头针若干。显微镜每人一台，凹玻片、载玻片每人3 片。
3 、化学试剂：30 ％过氧化氢、a－萘粉、联苯胺、乙醇、无水碳酸钠、蔗糖、琼脂。
三、方法和步骤： 1 、形态观察法：
每种植物的花粉都有一定的形态特征，一般都把具有其典型形态的花粉粒（指具有花粉粒的大小、形状和色泽等）作为有生活力的花粉，把小形的、皱缩的、畸形的作为没有生活力的花粉，如苹果正常花粉粒多为长椭圆形、桃子多为长椭圆形、葡萄多为长桶形、仙客来的花粉粒为马蹄形、松树的花粉粒呈元宝形、百合的花粉呈船形、南瓜的花粉满身长刺，就象“小刺猬”一样。此外，植物种类不同，花粉粒表面的沟纹也不相同，这要在电子扫描显微镜下才能看到，如柑橘类花粉粒表面的沟纹就如满天星斗，菊花的花粉粒表面沟纹就象开放的花朵。
检查时，把花粉撒放在载玻片上，在显微镜下查看3 个视野，被检查的花粉粒数应在100 个以上，计算形态正常花粉粒占花粉粒总数的百分率。
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形态观察法的特点是简单易行，但准确性较差，所得数值往往偏高，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。 2 、沙尔达考夫染色法 ( 1 )试剂配制：
此法所用试剂分1 、2 两号溶液。
A 、1 号试剂配制：用0 . 2 克联苯胺溶于100 毫升50 ％的乙醇中；用0．15克的a 一奈酚溶于100 毫升50 ％的乙醇；用0.25 克的无水碳酸钠溶于100 毫升的蒸馏水中。三种溶液配好后分装在三个棕色瓶中，使用前再将上述三种溶液等量混合作为1 号试剂（因混合液不稳定必须在使用前混合配制）。 B 、2 号试剂：O.3 ％的过氧化氢。 ( 2 )方法：
以干棉球蘸少量花粉，振播到普通载玻片上，然后滴上1 号试剂及2 号试剂各一滴，用玻棒把花粉和溶液混搅均匀，静置3 一4 分钟后进行观察，凡花粉粒染成红色、玫瑰红、紫红色的即被认为有生活力的花粉。呈色愈深，表明生活力愈强。失去生活力的花粉则呈淡黄色或无色，需要注意的是用这种方法测定新鲜花粉的生活力时，有些发育畸形的花粉粒也被染成红色，（这是因为这些花粉虽然发育畸形，但其仍含有一定量的具有活性的过氧化氢酶的缘故）但这类花粉不能萌发，所以不能将其计入有生活力的花粉内。每片应观察三个视野，观察的花粉粒总数应在100 粒以上，然后计算具有生活力花粉粒所占的百分数，以表示花粉生活力的强弱。此法每人每种花粉做一片。
3、发芽实验法（只做一种）
此法能精确测定出具有生活力、能够发芽的花粉粒数，还能看到花粉粒发芽的真实情况。
( 1 )悬滴液发芽法
把供试花粉播种在一定浓度的培养液液面上，使其花粉真实地发芽，以测定花粉生活力的一种方法。培养液一般都用蔗糖或葡萄溶液，其浓度因植物种类不同，差别很大，一般是桃10 % ，梨、苹果10 一15 % ，柑桔25 一30 % ，糖液浓度的高低是为了调节培养基的渗透压，防止供试的花粉粒在溶液中发生破裂。
操作方法：配制10 ％的蔗糖溶液，滴一滴在凹薄片的凹槽内，取少许花粉置于溶液中。用大头针搅均匀，然后将凹薄片放在温度20 一25 ℃ 、湿度70 一80 ％的瓷盘中，加盖。2 小时后在显微镜下就可观察到花粉粒开始萌发，12 一24 小时后
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在显微镜下检查发芽花粉粒的百分率。生活力正常的花粉粒发芽时呈圆形、花粉管直线延伸；生活力差的花粉粒发芽后其花粉管弯曲；没有生活力的花粉粒不能萌发。 ( 2 )培养基发芽法
① 培养基的配制：
在250ml 烧杯中注入90ml 的蒸馏水，加入1 克的琼脂（洋菜），在酒精灯上加热，使之完全溶解，然后加入10 克的蔗糖（制备含糖量10 ％的培养基时用量。需要时，可配置不同含糖量的培养基，进行比较试验），注意用玻璃棒不断搅拌，使其溶化均匀。有条件时还可以加入微量的柱头浸出液、维生素等以造成最适于花粉发芽的环境条件。
须加注意的是：在熬制培养基时，应在烧杯上的液面处贴一纸条或用玻璃铅笔沿液面划线为记，当液面在熬制过程中因水分蒸发下降时，应及时添加蒸馏水，以保持液面的稳定和培养基的准确浓度。其次是将熬制好的培养基溶液连烧杯放入盛有35 ℃ 热水的更大的烧杯（500ml 烧杯）中防止冷却凝固，备随后使用，对已经冷却凝固的培养基在使用时重新加热溶化。 ② 用品消毒：
发芽实验所用的载玻片、镊子等都需在烧杯中煮沸20 分钟进行消毒、冷却后取出用酒精棉球擦干，放在大培养皿中备用，经过消毒的载玻片使用时要尽量减少和手指接触的面积，以减少污染。 ③ 花粉播种：
用玻璃棒蘸培养基溶液一滴滴在平面载玻片上，凝固后用干棉球蘸着花粉，轻轻震动棉球将花粉播种在培养基表面，注意花粉分布应松散均匀，每个视野中以分布20 一50 粒左右的花粉为宜，然后将载玻片放在25 ℃ 的条件下，湿度70 一80 ％的瓷盘中。2 小时后花粉粒开始萌芽，12 一24 个小时后，在显微镜下检查花粉生活力。 四、作业
1 、列表比较用四种方法测定同一品种花粉生活力的结果，表中项目应包括测定方法，每次视野中的花粉粒数，具有生活力的花粉粒数、三视野平均值、百分率，表下注明实验品种，培养基浓度，采粉时间，测定时间和其它需要说明的问题等。 2 、利用显微镜下看到的真实现象，绘出正常花粉粒、没有生活力的花粉粒、已经膨大即将发芽的花粉粒和已经发芽花粉粒的写生图各一个。
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