发布时间 : 星期五 文章微生物实验思考题 南京工业大学 生物与制药工程学院更新完毕开始阅读
2、美蓝色染色液染色时间对酵母菌死活细胞数量有何影响？试对所得的结果进行分析和讨论。
答：美蓝染色液染色时间越长，酵母菌死细胞数量越多，而活细胞数量越少。
实验六 霉菌形态的观察
1、试分析Subouraud 琼脂培养基的优点？ 答：①pH偏酸性，适合霉菌生长； ②氯霉素可抑制细菌的生长；
2、载片培养法中“U”形玻璃棒和培养皿底部的滤纸上加入适量灭菌水的目的是什么？除了加灭菌水之外，还可以加入什么溶液？ 答：①目的是保证培养皿内适宜温湿度；
②还可通过无菌操作在培养小室中园滤纸片上加3至5ml灭菌的20%的甘油。 3、载片培养还适宜哪些微生物进行形态观察？
答：载片培养还适宜培养放线菌、假丝酵母等分枝丝状体进行形态观察。 4、为什么载片培养所用的材料均要灭菌？
答：载片培养所用的材料如不灭菌，则极易引入杀菌，当接种到培养基上时，很有可能会影响霉菌的生长，而且也会影响到后期的显微观察。
实验七 微生物测微技术
一、实验原理
显微测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺两个相互配合使用的部件。 镜台测微尺总长1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100 个小格，每一小格长度为0.01mm。 目镜测微尺分50小格和100小格两种。
二、实验方法和步骤
目镜测微尺放置 目镜测微尺的标定 酵母菌大小的测定 将镜台测微尺用擦镜纸擦拭干净，放进盒子里保存，同时正确清理和维护显微镜。 注：放置镜台测微尺时有刻度的一面朝上；目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行；使两尺左边某一区域内两线完全重合后找出右边另外相重合的线，分别数出两重和线。
目镜测微尺每格长度（um）=重合线间镜台测微尺格数*10/重合线间目镜测微尺格数
三、思考题
1、为什么使用不同放大倍数的目镜或者物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？
答：因为目镜测微尺在不同放大倍数的目镜和物镜下的大小是不一样的，也就是比例不同，所以要重新校正。
2、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一菌体大小时，其测定结果是否相同？为什么？
答：相同。因为同一菌体的大小是一定的，不同放大倍数的物镜不会改变菌体的实际大小，但物镜的放大倍数越高，目镜测微尺的精确度越高，测量月准确。 3、测量菌体大小时对菌龄有无要求？为什么？
答：有要求。因为菌在不同生长时期细胞大小有时会有较大变化，若需自己制样进行细菌大小测定时，应注意选择处于对数生长期的菌体细胞材料。
实验八 微生物技术技术-血球计数板法
一、实验原理
测定细胞数目的方法有直接计数法（如血球计数板计数计数）和间接计数法（如平板菌落计数法）
显微镜计数的优点是直观、快速、操作简单，缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对活动性强的活菌进行计数。
其中血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞，霉菌孢子等计数。 二、实验方法和步骤
1、镜检计数板的计数室（在加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物则需清洗）
2、加样品(菌悬液需摇匀） 3、计数(加样后静置5min） 4、清洗血球计数板
注：1、活细胞是透明的，因此在进行显微镜计数时应适当减低视野亮度以增大反差；
2、进行显微计数是应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察计数。
3、酵母菌以每格5到10个菌体为宜。 三、思考题
1、用血球计数板计数时，哪些步骤容易造成误差？应如何尽量减少误差力求准确？
答：容易造成误差的步骤（1）计数室的清洗（2）加样时是否将菌液摇匀（3）计数
尽量减少误差的措施：
(1)加样前应先镜检计数室，若有污物则需清洗后镜检，直至计数室没有污物； (2)加样前先摇匀菌液，因为放置一段时间的菌液其浓度是不均匀的； (3)计数时先根据计数板的规格确定计数方法：记上不计下，记左不计右。 2、血球计数板计数有哪些缺点？
答：优点是直观、快速、操作简单，可直接观察到微生物的总数，缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对活动性强的活菌进行计数。 3、利用血球计数板计数时，注入的菌液为什么不能过多？ 答：（1）注入菌液过多，会将盖玻片顶起而改变计数室的容积。
（2）注入菌液过多，也会使计数室中格线变得模糊，无法清楚的计数。
实验九 培养基的制备与高压蒸汽灭菌
一、实验原理
培养基是人工配置的适合我微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。含有碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等六大营养物质。一般培养细菌的常用营养琼脂培养基，放线菌常用高氏一号培养基，酵母菌常用麦芽汁培养基，霉菌常用马铃薯培养基（PDA）。 高压蒸汽灭菌：121℃，15-30min。 二、思考题
1、为什么分装于三角瓶中的培养基装量不能过多？
答：①分装量太多，三角瓶内培养极易沾染瓶口及棉塞而造成污染；②分装量太多不利于震荡摇匀；③分装量太多会使培养基灭菌不彻底。
2、配置培养基有哪几个步骤？在操作过程中应注意什么问题？为什么？