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1. 性腺；2. 左肾的后部；3. 输卵管分泌部；4. 子宫部；5. 阴道部；6. 泄殖腔；7. 心脏； 8. 左肺；9. 肝脏；10. 腺胃；11. 肌胃；12. 小肠；13. 盲肠。
图2-1 鸭胚解剖直观图
? 固定：4%中性甲醛（10％中性福尔马林）固定4-6h。组织大时18-24h或更长。
? 水洗：用流水冲洗已经固定的组织块30min。 ? 脱水（常温下）
① 乙醇-甲醛（AF）液固定：60min
② 80％乙醇：120min ③ 95％乙醇I：120min ④ 95％乙醇II：120min
⑤ 无水乙醇I：60min ⑥ 无水乙醇II：60min ⑦ 无水乙醇III：60min
注意事项：① 未经充分固定的组织不得进入脱水程序；
② 用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5-10倍以上； ③ 自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水；
④ 脱水试剂应及时过滤、更换（500mL乙醇可用于500个组织块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇，当硫酸铜变蓝时，提示需要更换）
⑤ 较大组织块的脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水； ⑥ 组织块置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）；
⑦ 丙酮脱水性能强，会使组织块过缩、硬脆，不宜用以替代无水乙醇。
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? 透明
① 二甲苯I：20min ② 二甲苯II：20min ③ 二甲苯III：20min
注意事项：① 二甲苯的容积应为组织块总体积的5-10倍以上；
② 组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防组织硬、脆），并依不同种类组织及其大小而异（组织块呈现棕黄或暗红色透明即可）； ③ 二甲苯应及时过滤、更换；
④ 组织块经二甲苯适度处理后不显透明时，常提示该组织的固定或脱水不充分，应查找原因并妥善处理。
? 浸蜡
① 石蜡I（60-62℃）：60min ② 石蜡II（60-62℃）：60min ③ 石蜡III（60-62℃）：60min
注意事项：① 融化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内（65°C）进行，不得用明火加温；
② 熔蜡的容积应为组织块总体积的5-10倍以上；
③ 组织块经二甲苯适度透明后方可转入浸蜡过程，应尽可能减少透明后组织块表面的二甲苯带入熔蜡中；
④ 浸蜡时间适宜，过短时浸蜡不充分（组织过软），过长时间组织硬脆； ⑤ 熔蜡应及时过滤、更换。
? 包埋
① 用加热的镊子轻轻夹取已经过浸蜡的组织块，使组织块的最大面或被特别指定处的组织面向 下，再将熔化的石蜡倾入切片盒中，应将组织块平整地置放于切片盒底面的中央处。包埋于 同一蜡块内的多块细小组织应彼此靠近并位于同一平面上；腔壁、皮肤和黏膜组织必须垂直 包埋（立埋）。
② 待包切片盒内的熔蜡表面凝固后，立即将切片盒移入冷水中加速凝固。
③ 从切片盒中取出凝固的包埋蜡块（简称蜡块），用刀片去除组织块周围的过多石蜡 ④ 用铅笔对包埋有组织的石蜡进行编号，要求标出组织块来源，还应清晰可见。 ⑤ 把修整好的蜡块放入冰箱，以备切片
注意事项：① 应将组织块严格分件包埋。包埋时一定要首先认真核对组织块的编号（包括组织
块种类和器官）。
② 必须严防各种异物污染，勿将无关组织如缝线、纸屑或其他异物（尤其是硬质异物）埋入蜡块内。
③ 包埋过程里要操作迅速，以免组织块尚未埋妥前熔蜡凝固。
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? 切片：调节切片机（一般厚度调至3μm，刀片倾斜角5°），进行切片。切出的蜡片应连 续呈带状，完整无缺，厚度适宜（3-5μm）、均匀、无刀痕、颤痕、皱褶、开裂、缺损、松解
? 镊子轻轻夹取完整、无刀痕、厚度均匀的蜡片，放入伸展器的温水中（37℃），
使切片全面展开（注意：必须水温适宜、洁净尤其是水面；每切完一个蜡块后；必须认真清理
水面，不得遗留其他病例的组织碎片，以免污染）。对于展片困难的切片经30%的乙醇初展后 再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水盒内可使切片更易展平。
? 经APES处理过的载玻片捞展得好的片子，蜡片与载玻片之间无气泡。 ⑴ 烤片：保持电热鼓风干燥箱的温度在60℃，烘烤 60min。 2.2.3 苏木精－伊红（HE）染色 ? 二甲苯I： 5min
? 二甲苯II ： 5min ? 无水酒精I： 3min 无水酒精II： 3min ? 95% 酒精 I： 3min 95% 酒精 II： 3min ? 80% 酒精：1min ? 蒸馏水：1min
? 苏木素液染色：30min（注意：染色的效果做好在显微镜下观察一下，如果效果不好，再加长时间，时间长了要更换苏木素液）
? 流水洗去苏木精液：30min（注意：染色的效果最好在显微镜下观察一下，如果效果不好，再加长时间，时间长了要更换0.5％伊红液） ? 水洗：2s
? 0.5％伊红液染色：20min ⑴ 蒸馏水稍洗：2s ⑵ 80％酒精：2s
⑶ 95%酒精 I：3min 95%酒精 II：3min ⑷ 无水酒精 I：5min 无水酒精II：5min 无水酒精II：5min ⑸ 二甲苯I：5min 二甲苯II：5min 二甲苯III：5min
⑹ 中性树胶封固：干涸前封好（注意：封片要速度快，以免二甲苯挥发完了影响切片的色泽效
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果，最好在10秒中完成）。 2.2.4 显微观察、照相
对制作好的切片在荧光倒置显微镜下进行观察，对来自不同浓度的切片进行比较。
3. 结果
3.1 微囊藻毒素的测定结果
3.1.1 酶标仪读板得到数据（图3-1）和拟合曲线图（图3-2）
图3-1 微囊藻毒素的ELISA检测结果
读板的设置为：A01为阴性对照，B01为0.1ng/mL的标准品，C01为0.3ng/mL的标准品，D01为0.8ng/mL的标准品、E01为1.0ng/mL的标准品，F01为2.0ng/mL的标准品，G01为稀释500万倍的MC，H01为稀释1000万倍的MC，A02为稀释2000万倍的MC，B02为稀释4000万倍的MC，D05为空白对照组。
图3-2 ELISA检测拟合曲线
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