发布时间 : 星期六 文章广州大学微生物学期末实验报告《土壤中产淀粉酶芽胞杆菌的筛选》 - 图文更新完毕开始阅读
?.卵黄反应试验： *记录：（实验采用图片进行记录）
菌种T：能生长，菌落四周呈现光洁乳白色没有透明圈产生，不透明圈半径为0.3cm。
表示卵磷脂没有分解生成脂肪，说明菌种T不产生卵磷脂酶，呈阴性（-）。
菌种R：菌落四周形成乳白色的浑浊环，生长情况旺盛C程度与T菌种相似，不透明
圈半径为0.30cm。表示卵磷脂分解生成脂肪，说明菌种R在培养过程中产生 卵磷脂酶，呈阳性（+）。
空白组：无菌生长，菌落四周没有形成乳白色的浑浊环。
【切记】：
鸡蛋的卵黄由于有卵黄膜包裹，不与外界相通，因此为无菌状态，无需灭菌。在吸取卵黄液前，应把蛋清除去，不可弄坏乱卵黄膜。
另外在配制培养基的时候我们发现，卵黄在与生理盐水混合的时候，实质上会增加环境中细菌的风险，所以其实我们可以先将生理盐水先加入营养琼脂中，一边直接将蛋黄用移液枪头加入营养琼脂时一边用枪头与营养琼脂充分搅拌。随后冰箱中倒置过夜12小时后使用。
实验现象记录分析：（在同一培养皿中进行平衡实验的弊端是卵黄培养基十分浑浊且生长出的菌落较大，会遮盖这在皿底的记号，故最后只能在皿底进行记录）
通过以上实验我们可以观察到菌种R的菌落周围有乳白色浑浊环生成，故证明菌种R会产生卵磷脂酶从而分解鸡蛋黄中的卵磷脂。卵磷脂酶，又称为α毒素, 它因能水解卵磷脂，可以水解各种组织的细胞，尤其是红细胞，它是一些细菌所产的毒素的主要成分，蛇毒的毒性也是由它引起的。所以卵磷脂酶对其他细胞的破坏能力同样很强。
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?.溶菌酶试验： *记录：（实验采用文字进行记录）
菌种R：均能生长，菌落周围没有产生抑菌圈，呈阳性（—）。 菌种T：均能生长，菌落周围没有产生抑菌圈，呈阴性（—）。 空白组：（涂布生理盐水）无菌生长，无明显变化。
实验现象记录分析：
本实验证明了菌种T和菌种R均能产生抗溶菌酶的物质，因此均能生长。 经过微生物的复习过程我们知道溶菌酶N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
所以通过以上现象可以证明菌种T和R均可产生抗溶菌酶的物质从而去抵御溶菌酶作用于其细胞壁的肽聚糖。
?.淀粉水解试验： *记录：（实验采用图片进行记录）
菌种R：在平板上滴加碘液后，平板呈蓝黑色，菌种R(下图左边的菌落)周围形成约
0.30cm的透明圈，菌种R能产生水解淀粉的物质，表示淀粉水解试验为阳性。
菌种T：在平板上滴加碘液后，平板呈蓝黑色，菌种T周围并没有产生透明圈，故表示
淀粉水解试验为阴性。
R菌种 T菌种
（实验现象记录分析见下页）
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实验现象记录分析：
通过对以上实验现象的分析，我们可以发现菌种R能在淀粉培养基中产生透明圈，由于碘会与淀粉形成蓝色的络合物，但由于R菌种能产生淀粉酶对淀粉进行利用分解，故在菌落一周均不存在淀粉，所以蓝黑色只会存在于有淀粉的地方从而判断R菌能产生淀粉酶；而T菌种不能分泌淀粉酶不能对淀粉进行利用，故不产生透明圈，判断为阴性反应。 实质上我们的实验题目正是“土壤样品中筛选出2株产淀粉酶芽胞杆菌”但我们组都无法考虑到这个问题，未于开始实验时进行该淀粉酶实验，导致到后期只剩下2株菌种，导致实验未能完满达到目睹。幸运的是还恰好在2株菌种中其中的R菌种是可以产淀粉酶的，导致实验没有完全失败，这一点应该引起我的警醒。
生化鉴定现象汇总
接触酶试验 葡萄糖发酵试验 乳糖发酵培养基 木糖发酵培养基 阿拉伯糖培养基 甘露醇发酵培养基 V.P试验 MR试验 吲哚试验 2%NaCl耐盐试验 5%NaCl耐盐试验 7%NaCl耐盐试验 10% NaCl耐盐试验 柠檬酸盐利用试验 明胶试验 硝酸盐还原试验 酪素水解试验 酪氨酸水解试验 运动性试验 温度试验 PH5.7试验 PH7.2试验 卵黄反应试验 0.001%溶菌酶试验 淀粉水解试验 革兰氏反应 芽孢染色检验 鉴定结果
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菌种R（河边） - + - - - - - + - + - - - + - + + - - 35-40 - - + - + + + 蜡状芽孢杆菌 菌种T（树下） - + - - - - - + - + - - - - + + + - + 35-45 + + - - - + + 凝结芽孢杆菌 八．实验总结与心得：
通过接近接近半个月以来的微生物实验，同时作为组员与组长的我感触良多。一个实
验需要的是严谨的态度，合理的规划，进度的把握，操作的一丝不苟。在这么多个实验中，最令我感到印象深刻的是温度实验和酵素实验，温度实验是我们划平板数量最多的一次，在这组温度实验中我已经将划平板的手法练得十分纯熟，已经可以尽量在平板上尽量避免划破，另外我们也有亲自参与到将培养皿放置到各个不同梯度的培养箱的过程，明白实验要进行的准确和有条不紊有规有举。另外的酵素实验是我亲自操作，将两个组分放置到不同温度的高压灭菌锅进行灭菌，再将其混合而制，是我个人配制的最复杂的培养基，而我们团队配制出来的最复杂的应该是卵黄实验的培养基。
在失误中，我们也善于总结，首先最大的错误是把首要条件产淀粉酶的芽孢杆菌中的“产淀粉酶”疏忽了并把它放到筛选菌种后再进行，这是在策划中出了问题。另外我们也分别从柠檬酸盐利用实验、营养肉汤的PH实验中发现问题，并在其中作了分析和讨论。与其说在与预期结果吻合的实验相比，我觉得错误的实验同样能带给我充分的知识，更加能带给我更多的思考，这种感悟是在本学期初进行的生化实验中充分体验到的，同样也呈现在本次微生物学实验当中。
另外，在仔细对实验结果进行分析和对培养基材料、操作步骤进行考虑之后。我们也能充分地了解到生化和微生物的书本理论知识。如“运动试验中的细菌鞭毛”“溶菌酶的作用”“明胶试验中胞外酶的作用、蛋白质的分解”“硝酸盐还原的机理”这些都能充分地使我们的理论知识和实践操作充分结合起来，同时在后期发现弄懂了以上机理后也能减轻一定的复习压力，真正地做到将书本知识应用到实践操作中。同时在匹配伯杰氏细菌鉴定手册时，在如何对鉴别书本进行利用的方面，我们也有了一定的了解和操作经验。
本次实验的确获益匪浅，本人在这次实验中学到的不仅仅是实践操作和理论知识，同样重要的是如何分配好时间，调配好一个团队，从而去合理规划实验进度。这些收获都一一地烙印在我心中。最后，感谢陈老师、熊老师对我们的认真教导和整个漫长的实验过程中的陪伴和支持，也感谢岳老师对我们提供了完善的实验器材和准备；感谢我的组员们；感谢这次微生物实验，因为的确带给我许多收获。相信对以后的就业和事业的发展都会有很大的指导作用。
报告人：
参考文献：
1.《伯杰细菌鉴定手册》第八版 2.《微生物学教程》周德庆
3.《微生物学实验》沈萍、陈向东
4.《淀粉酶芽孢杆菌菌株的筛选》唐丽江
参考网站：
百度百科、百度知道
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另附：
实验初期日志记录：
实验记录：
Day1（2015/12/3星期四）：
【配制土壤悬浊液】已配好0.9%的生理盐水并加入玻璃珠于锥形瓶，高压灭菌后，将已采集的泥土样品（河边、树下）摇匀后各取10.0g于100ml生理盐水的锥形瓶中，随后我们将其放置水浴摇床进行保温并摇匀，并在85°C~90°C区间保持了20min（目的为了杀死不能产生芽孢的细菌），取出并将该两组土壤悬浊液放置入冰箱冷藏。 Day2（2015/12/5 星期六）：
【培养土壤液中的菌种】将冰箱内的土壤悬浊液取出，待其恢复常温后，用移液枪吸取1ml并将其加入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中制成1:10浓度的提取液，并按此原理稀释为1:100、1:1000、1:10000（以及为防河边土壤有机质过多特别制备的1:100000提取液，但其后证明无菌落生成），用以上的不同浓度梯度提取液接种平板，放置进37°C恒温培养箱培养。时间记录23:00
Day3（2015/12/6 星期日）
【挑出单菌落】取出培养皿时间：22:20，培养时间为23小时。从树下的（1:100、1:1000、1:10000）中挑选出3个单菌落，并在河边的（1:100、1:1000、1:10000）中挑选出7个单菌落；将10个已灭菌的培养皿标好采样地点及提取液浓度，并在皿底画十字分为1、2、3、4区域，以便其后进行划线纯化。将以上10个已接种培养皿放入37°C恒温培养箱培养。时间记录23:30。
备注：第一次的倒平板技术未纯熟，厚度不足且手法拙劣未能把握角度和力度，故会多出现划破培养基的现象，但划线路径仍较长，这点比较满意。为防培养失败，保留土壤提取液的培养皿进行备份）
Day4（2015/12/7 星期一）
【第二次划线纯化】取出时间19:30培养时间为18小时，由于观察到其中有两个培养基中的培养结果其菌落形态颜色都十分相似，故将其筛去，留下9个菌种进行纯化。继续将其编好号打标签后进行划线纯化，并将划线后的9个培养皿放置进入37°C恒温培养箱培养，时间记录：21:40 实验记录：实质上星期天的挑菌落进行划线比较成功，已经可以筛选到杂菌落较少的单菌落（从肉眼观察）没有失败的培养皿 Day5（2015/12/8 星期二）
【第三次划线纯化】取出时间21:30培养时间约24小时（培养时间偏长），将9个菌种进行划线后继续培养，并开始配制牛肉膏蛋白胨，和淀粉牛肉蛋白胨的培养基并进行121摄氏度高压灭菌
Day6（2015/12/9 星期三）
【第四次划线纯化】取出时间20:00培养时间22.5小时，将9个菌种进行单染色法，初步判定分别编号为2、9两个菌种无杂菌（2和9均是形态差别较大并处于河边和树下不同环境下纯化的菌种），并进行淀粉水解实验，其余菌种舍去，为了明天实验的顺利展开进行第四次平板划线，为菌种保藏作准备同时继续纯化菌种进一步保证准确性。 Day7（2015/12/9 星期四）
【菌种保藏】并为保证明天的实验菌活性和菌种保藏，将2、9进行斜面接种（6支试管三组，其中一组为了明天实验活化，一组为了菌种保藏，另一组进行备用）
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