发布时间 : 星期五 文章广州大学微生物学期末实验报告《土壤中产淀粉酶芽胞杆菌的筛选》 - 图文更新完毕开始阅读
5.细菌生化鉴定
①接触酶试验： *记录：（产气为动态过程，采用文字记录）
菌种R：挑取活化的菌种R并接入装有H2O2的试管中，观察到无气泡产生，说明该菌
的接触酶试验为阴性。
菌种T：菌种T与菌种R实验现象大致相同。挑取活化的菌种T并接入装有H2O2的试
管中，观察到无气泡产生，说明该菌的接触酶试验为阴性。
【备注】由于第一次使用浓度较稀的H2O2无反应，但通过用重新稀释得到的H2O2溶
液仍无反应，故均判断为阴性
实验现象分析：
由以上现象判断，T菌种和B菌种均不产生接触酶
②.糖发酵试验： *记录：（实验组较多，采用文字记录）
R、T两种菌在木糖、阿拉伯糖、乳糖、甘露醇发酵中均呈现为阴性(-),既不产酸也不
产气,【本次实验均采用1个菌种2个实验，即进行平衡实验且留有每种糖发酵实验空白对照，确保实验的准确性】
实验项目 菌种A 菌种B 空白对照 葡萄糖发酵试验 +（变色不产气） +（变色不产气） - 乳糖发酵试验 - - - 木糖发酵试验 - - - 阿拉伯糖试验 - - - 甘露醇发酵试验 - - - 实验现象分析：以上结果现象说明T、R两个菌种均能分解利用培养基中的葡萄糖作为碳
源生长且将葡萄糖分解为有机酸使溴甲酚紫变色为黄色，但产酸不产气，故杜氏小管中无气泡生成，且T、R两组实验的黄色深浅近乎一样，故可判定它们分解葡萄糖的效率相近，能较好地分解利用培养基中的葡萄糖。
③.VP试验： *记录：（采用文字记录）
菌种R的两个平衡组现象相同，均呈黄色，为阴性（-）； 菌种T的两个平衡组现象相同，均呈黄色，为阴性（-）。 空白组：呈黄色
实验现象分析：
由以上现象记录判断R、T菌种均为VP试验阴性，说明R、T菌种均不能利用葡萄糖脱羧形成乙酰甲基甲醇。所以均与空白组一样呈现黄色。
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④.MR试验： *记录：（采用文字记录）
菌种R：加甲基红指示剂1-2滴，呈现浅的淡红色，判断呈弱阳性。
菌种T：加甲基红指示剂1-2滴，呈现鲜红色，判断呈阳性。 空白组：无明显现象。
实验现象分析：在已判断葡萄糖发酵试验为阳性的基础下，R、T两菌种在分解葡萄
糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量有机酸，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红变色。由以上现象及分析可判断MR试验中为T为阳性、R为弱阳性。
p.s：医学上的检验标准：较为严格，甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.4-6.0，其pK值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度而增强红色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。
⑤.吲哚试验：
从37°C培养箱经培养24h后取出R、T两组实验组，在培养液中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。
*记录：（采用文字记录）
加入吲哚试剂后
菌种R：无红色产生，呈阴性 菌种T：无红色产生，呈阴性
实验现象分析：
由以上加入吲哚试剂的现象可得出R、T两菌种均不能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质)，进而不能与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，无法生成玫瑰吲哚而呈无色，故判断R、T两菌种均为吲哚试验阴性。
⑥.耐盐实验： *记录：（组别较多，采用文字记录现象）
含盐量为2%的培养基： T和R菌种均能生长，形成白色菌落，其中T菌落面积较大 含盐量为5%的培养基：T和R菌种均不能生长 含盐量为7%的培养基: T和R菌种均不能生长 含盐量为10%的培养基：T和R菌种均不能生长
实验现象分析：
T菌种能在含盐量2%的培养基中生长；而B菌种也能2%的培养基中生长,但两个菌种在含盐量为5%的培养基、含盐量为7%的培养基、含盐量为10%的培养基均不能生长
同时可以初步猜想华南地区即广州大学土壤点的盐浓度较低。T、R两个菌种只适合在含盐量较低的环境中存活，耐盐度较差即同时说明对环境中盐度变化适应能力差。
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⑦.柠檬酸盐利用试验：
*记录（现象以文字及图片记录）
菌种R：菌种R经过两天培养，柠檬酸盐培养基颜色由绿色变成蓝色，说明说明菌种R在柠檬酸盐利用试验中表现为阳性（+）
菌种T：菌种T与空白对照一样，柠檬酸盐培养基颜色依然呈现绿色。说明菌种T在柠檬酸盐利用试验中表现为阴性（-），不能利用柠檬酸盐作为碳源生长且接种物已转变为黄褐色，且后面稀释划线部分无新菌落生成，故可推断不能生长繁殖的T菌落已经死亡。
实验现象记录分析：
柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠檬酸钠为碳的唯一来源。而磷酸二氢铵是氮的唯一来源。如R菌能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。而不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌如T菌，在该培养基上不生长，不能利用柠檬酸钠作为碳源,且观察到T菌的划线部分无新的菌落生成，而旧的接种物已变为黄褐色（不知是否可以判定已经死亡）。 【同时在T菌培养基中发现一个蓝色点，经判断为培养基被划破的地方，应被杂菌污染，所以个人认为若在培养皿中进行柠檬酸盐实验，虽然变色现象会比试管更明显，但由于与空气接触面积大，易增加杂菌污染，所以更应避免破坏培养基，且必须倒置培养】
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⑧.明胶试验： *记录：（为性质实验，故采用文字记录）
经过在20℃培养箱中培养7天后，从培养箱中取出，但因为室温较高故所有试管中的明胶均不能凝固，所以我们将冰箱中放置20分钟后再进行观察。
在取出培养箱时，连同空白组和平衡实验带来的总和共5支管，均是液体状态，无法判断是否被细菌液化，故放置进冰箱静置观20分钟观察。结果呈现如下： 菌种R:2支试管明胶状态与空白组情况一样，均为凝结状态，倾斜后液体不晃动呈现半固体状态。故判断R菌种为明胶试验阴性（-）
菌种T:2支试管明胶呈现液体状，倾斜后液体会流动。故判断为明胶试验阳性（+） 空白组：凝固状态，倾斜后明胶不流动。
菌种R 菌种T 菌种R 空白组
实验现象记录分析：
*通过本次明胶试验，我们可以判定菌种R不能产生明胶酶，菌种T可以产生明胶酶。
因为该实验原理是利用某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体的明胶培养基成为流动的液体。
*而实质上我们也可以同时明白到明胶【明胶是胶原部分水解而得到的一类蛋白质】
作为一种大分子有机物不能被细菌直接利用，故细菌会分解出一种胞外酶-明胶酶，使明胶这种大分子被酶分解成氨基酸后进入蛋白质利用，而氨基酸为小分子与蛋白质的结构不同，故不能凝固。我同时感觉到这个实验对我们的生化机理也有十分重要的指导作用，可以解释许多细胞分泌胞外酶的现象。
p.s．同时其实我们发现这种明胶运动实验所耗时间较长为7天，所以通过百度搜寻，我们找到一个更为快捷得出结果的医学检验方法。明胶琼脂平板法可于普通琼脂加入1%明胶倾注平板后，分为四个区，每个区分别划线接种一种被检菌，经24-48小时培养后，于培养基表面注入氯化汞溶液(氯化汞12g，蒸馏水80ml，浓盐酸16ml)，如细菌液化明胶，则在菌落周围出现透明带。通过用透明带产生的效果，减少细菌需要消耗的底物的量，同时使效果更明显，且透明带的出现远远比明胶液化效果的产生来得更快。
在现实应用上，该测试更多用于医学检测如：胃肠炎、肠热症、菌血症或败血症、破伤风、气性坏疽、肉毒中毒、结肠炎等急性疾病，故诊断时间和处理时间应尽可能压缩，故根据准确性和时效性，可能以上查到的方法2更适合用于现实生活。
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