发布时间 : 星期一 文章仪器分析实验一更新完毕开始阅读
fi?AsAi?WiWs
进行定量分析时，将需一定量的内标物S加入欲测的样品中，进行色谱分离，测得的峰面积分别为Ai′和As′ 则：
W?i?fi?A?iA?sW?s
W’i 、W’ s′分别为欲测的样品中组分i的量和内标物S的量 [实验条件]：
固定相：YWG—C18；流动相：甲醇/水 55:45，含20 mmol/L四丁基溴化铵，并用KH2PO4/K2HPO4调整pH值在7.5—8.5之间。流量：1 mL/min；检测：紫外—254 nm，0.02 AUFS；温度：室温；纸速：5 mm/min
标准测试：对硝基苯酚；2，4—二硝基苯酚；2，5—二硝基苯酚2，6—二硝基苯酚；2，4，6三硝基苯酚；内标物：2，4—二氯苯酚 [操作步骤]
1、标准品溶液及内标物溶液的配制
（1）准确称取邻硝基苯酚10 mg，对硝基苯酚16 mg，2，4—二硝基苯酚10 mg，2，5—二硝基苯酚6 mg，2，6—二硝基苯酚10 mg，2，4，6三硝基苯酚20 mg。溶解于50 mL甲醇，转入100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀。
（2）准确称取2，4—二氯苯酚0.3克，配成100 mL甲醇/水溶液。 2、测定校对因子Fi
将1 mL内标物溶液与1 mL标物溶液混合。待仪器稳定后，注入10 μL混合液，记录色谱图1 3、 样品的测定
将欲分析的样品与内标物溶液混合。注入10 μL，记录色谱图2。根据保留数值，确定试样中含有哪些成分。 [数据处理]
1、测量色谱图1和图2中各峰的面积。
2、根据色谱图1的数据，计算各组分的相对校正因子。 3、根据色谱图2的数据，计算试样中各组分的含量，g/mL [思考题]
1、什么是反相液相色谱？
2、内标法的原理是什么？在什么情况下使用内标法？
实验六 * 离子色谱实验
第二章 光谱实验
实验六 芳香族化合物的紫外吸收光谱及溶剂效应
[ 实验目的]
1． 了解紫外可见光光度计的结构、用途及使用方法。
2． 了解紫外吸收光谱在有机化合物结构鉴定中的作用及原理。 3． 了解溶剂对吸收光谱的影响及原理。 [ 实验原理]
作为有机化合物结构解析四大光谱之一，紫外吸收光谱具有方法简单、仪器普及率高、操作简便，紫外吸收光谱吸收强度大检出灵敏度高，可进行定性、定量分析的特点。尽管紫外光谱谱带数目少、无精细结构、特征性差，只能反映分子中发色团和助色团及其附近的结构特征，无法反映整个分子特性，单靠紫外光谱数据去推断未知物的结构很困难，但是紫外光谱对于判断有机物中发色团和助色团种类、位置、数目以及区别饱和与不饱和化合物，测定分子中共轭程度进而确定未知物的结构骨架等方面有独到之处。因此紫外吸收光谱是配合红外、质谱、核磁进行有机物定性鉴定和结构分析的重要手段。
利用有机光谱定性的依据是化合物的吸收光谱特征，主要步骤是绘制纯样品的吸收光谱曲线，由光谱特征依据一般规律作出判断；用对比法比较未知物和已知纯化合物的吸收光谱，或将未知物吸收光谱与标准谱图对比，当浓度和溶剂相同时，若两者谱图相同（曲线形状、吸收峰数目、?max及 ?max等），说明两者是同一化合物。为进一步确证可换溶剂进行比较测定。常用的光谱图集是Sadtler谱图，它收集了46000多种化合物的紫外吸收光谱图，并附有五种索引，使用方便。最后要用其他化学、物理或物理化学等方法进行对照验证才能作出正确的结论。
有机物的紫外吸收光谱谱图解析：
1． 如果化合物在200-400nm内无吸收带，可推断未知物可能是饱和直链烃、脂环烃或
只含一个双键的烯烃。
2． 如果化合物只在270-350nm内有弱吸收带（? =10-100L .mol .cm）这是R带吸
收的特征，则可推断未知物可能是一个简单的、非共轭的含有杂原子的双键化合物，如：羰基、硝基等，此谱带是n ???跃迁产生的吸收带。
3． 如果化合物在210-250nm内有强吸收带（? ≥10L .mol .cm）这是K带吸收的特
征，则可推断未知物可能是含有共轭双键的化合物。如果在260-300nm内有强吸收带，则表明该化合物中含有三个或三个以上共轭双键。如果吸收带进入可见区，则该化合物可能是含有长共轭发色基团或是稠环化合物。
4． 如果化合物在250-300nm内有中强吸收带（? =103-104L .mol-1 .cm-1）这是苯环B
吸收带的特征，则可推断未知物往往含有苯环。
4
-1
-1-1
-1
芳香族化合物都具有环状的共轭体系，其紫外吸收光谱特征是具有????跃迁产生的三个特征吸收带，例如：苯在184nm（? =47000L .mol-1 .cm-1），在真空紫外区。在204nm（? =7900L .mol-1 .cm-1）有中强吸收带，在末端吸收范围。在254nm（?=204L .mol-1 .cm-1）有弱吸收带。当苯环上有取代基时能影响苯原有的三个吸收带，使B带简单化，向长波移动同时吸收强度增大。
溶剂的极性对溶质吸收峰的波长、强度和形状都有影响，当溶剂极性增大时???跃迁产生的吸收带红移，而n ???跃迁产生的吸收带蓝移。有些基团的紫外吸收光谱和溶液的pH关系很大，如苯酚在酸性与中性条件下的吸收光谱和碱性时不同。
溶剂的极性还影响吸收光谱的精细结构，当物质处于蒸气状态时，图谱的吸收峰上因振动吸收而表现出锯齿状精细结构。当溶剂从非极性变到极性时，精细结构逐渐消失，谱图趋于平滑。
[ 实验内容]
1． 苯及其衍生物的吸收光谱
在8个5 ml具塞比色管中分别加入0.5 ml苯、甲苯、苯酚、苯胺、硝基苯、苯甲醛、苯甲酸、萘的环己烷溶液，用环己烷稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英吸收池，以环己烷作参比溶液，在紫外区进行波长扫描，得8种物质的紫外吸收光谱。观察比较苯及其衍生物的吸收光谱，讨论取代基对苯原有的吸收带的影响。 2． 溶剂极性对紫外吸收光谱
（1）溶剂极性对n ???跃迁的影响
在3个5 ml具塞比色管中分别加入0.02 ml丁酮，各用环己烷、乙醇、水稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英吸收池，分别以各溶剂作参比溶液，在紫外区进行波长扫描，得丁酮在3种不同极性溶剂中的紫外吸收光谱。观察比较不同极性溶剂对n ???跃迁的影响。讨论原因。
（2）溶剂极性对????跃迁的影响
在3个5 ml具塞比色管中分别加入0.2 ml以异亚丙基丙酮，各用环己烷、乙醇、水稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英吸收池，分别以各溶剂作参比溶液，在紫外区进行波长扫描，得异亚丙基丙酮在3种不同极性溶剂中的紫外吸收光谱。观察比较不同极性溶剂对???跃迁的影响。讨论原因。
（3）溶剂极性对?—羰基化合物酮式和烯醇式互变异构体的影响：
在3个5 ml具塞比色管中分别加入0.5 ml乙酰乙酸乙酯，各用正己烷、乙醇、水稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英吸收池，分别以各溶剂作参比溶液，在紫外区进行波长扫描，得乙酰乙酸乙酯在3种不同极性溶剂中的紫外吸收光谱。观察比较不同极性溶剂中乙酰乙酸乙酯的烯醇式产生K带吸收（?max=243nm）的 ?值大小。讨论原因。 （4）溶剂对吸收光谱精细结构的影响
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用滴管取2滴苯加入1 cm石英吸收池中，加盖，放置2-3min后置于样品光路中，以空石英吸收池作参比，在紫外区进行波长扫描，得苯蒸气的吸收光谱。
在2个10 ml具塞比色管中分别加入0.01 ml苯，各用环己烷、乙醇稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英吸收池，分别以各溶剂作参比溶液，在紫外区进行波长扫描，得苯在2种不同极性溶剂中的紫外吸收光谱。观察比较以上3种吸收光谱，讨论溶剂对吸收光谱精细结构的影响，说明原因。
（5）溶液的酸碱性对苯酚吸收光谱的影响
在2个5 ml具塞比色管中分别加入0.5 ml苯酚水溶液，各用0.1mol .L-1HCl 和NaOH溶液稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英吸收池，以水作参比，在紫外区进行波长扫描，得苯酚在2种酸度不同的溶液中的吸收光谱。观察比较以上2种吸收光谱，讨论原因。 [ 仪器与试剂]
仪器：WFZ-26A 紫外可见光光度计（天津拓普） 1 cm石英吸收池
5 ml 10 ml具塞比色管 1ml刻度移液管
试剂：苯、环己烷、正己烷、乙醇、丁酮、氯仿。
溶液：HCl （0.1mol .L）、NaOH（0.1mol .L）、苯:环己烷（1:250）、、甲苯:环己烷（1:250）、苯酚:环己烷（0.25g .L）、苯胺:环己烷（1:250）、硝基苯:环己烷（1:250）、苯甲醛:环己烷（1:250）、苯甲酸:环己烷（0.8g .L-1）、萘:环己烷（0.3g .L-1）苯酚: 水（0.4g .L）乙酰乙酸乙酯分别用正己烷、乙醇、水配成浓度为0.5g .L的溶液。异亚丙基丙酮分别用正己烷、乙醇、水配成浓度为0.4 g .L-1的溶液。 五 [ 思考与讨论]
1． 讨论取代基对苯原有的吸收带的影响。
2． 为什么当溶剂极性增大时????跃迁产生的吸收带红移，而n ???跃迁产生的吸收
带蓝移？
3． 为什么溶剂的极性会影响吸收光谱的精细结构？
4． 为什么苯酚在酸性与中性条件下的吸收光谱和碱性时不同？
附录：
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WFZ—26A紫外可见分光光度计操作规程
1． 接通计算机电源，在WINDOW98桌面上，双击wfz-26图标，运行WFZ—26A紫外可见分光光度计
操作软件，按开机提示界面的要求，开启紫外主机电源。
2． 在计算机屏幕上，点击开机提示界面上的“确定”， 紫外主机进行系统初始化，各项目检测正确后
进入紫外可见分光光度计的操作软件主画面。
3． 在进行光谱测量前，应先进行“参数设置”，设置内容包括：测量模式、工作电源、扫描速度、波长
范围、测量范围、光谱带宽。